液相色譜儀的應用也比較廣泛，深受很多實驗工作者青睞，使用液相色譜儀的過程中可能會有一些問題，比如日常維護保養(yǎng)需要注意哪些地方等等。

液相色譜儀流動相的要求

　　是樣品的組分在柱填料和流動相之間質量交換來達到分離的要求，所以實驗室要求流動相需要舉報下面幾個特點。

　　1、純度

　　流動相需要按照規(guī)定使用HPLC的試劑。使用的時候過濾去除里面的顆粒性雜質或者一些別的物質。如果溶劑里面雜質過多，會導致液相色譜儀色譜柱的壽命降低。

　　2、溶解度

　　樣品的溶解度需要合適，不能過大或者過小。如果溶解的樣品不好會導致柱頭沉淀，不光是影響分離還會導致色譜柱使用壽命降低。

　　3、粘度

　　粘度要低(應<2cp)，高粘度溶劑會影響溶質的擴散、傳質，降低柱效，還會使柱壓降增加，使分離時間延長。Z好選擇沸點在100℃以下的流動相。

　　4、樣品

　　樣品必須易于回收，應選用揮發(fā)性溶劑。

　　5、流動相PH

　　采用液相色譜儀分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時，通過調(diào)節(jié)流動相的pH值，以YZ樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術稱為反相離子YZ技術。對于弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當pH值遠遠小于弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在;對弱堿，情況相反。

　　液相色譜儀分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

液相色譜儀泵的使用與維護

　　為了延長液相色譜儀泵的使用壽命和維持其輸液的穩(wěn)定性，必須按照下列注意事項進行操作：

　　1、防止任何固體微粒進入泵體，因為塵?；蚱渌魏坞s質微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相Z好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜(0.2μm或0.45μm)等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒(或片)。輸液泵的濾器應經(jīng)常清洗或更換。

　　2、泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，Z終產(chǎn)生漏液。

　　3、輸液泵的工作壓力決不要超過規(guī)定的Zgao壓力，否則會使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。

液相色譜儀色譜柱的使用與維護

　　在液相色譜儀日常分離分析工作中，色譜柱的正確使用和維護十分重要，色譜柱使用是否得當，直接影響色譜柱的壽命，在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。

　　1、柱子在裝卸、更換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，以免柱床產(chǎn)生空隙。

　　2、如果液相色譜儀用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。

　　3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩。

　　4、應逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>

　　5、如使用柱溫控制裝置時，應注意在通人流動相后才能升溫。

　　6、一般說來液相色譜儀色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。

　　7、選擇使用適宜的流動相，以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一個預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。

　　8、避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一個保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。

　　9、經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質。在液相色譜儀進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。

　　10、保存色譜柱時應將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。

　　11、液相色譜儀色譜柱在使用的時候，如果壓力突然，可能是燒結濾片堵塞，這個時候應該考慮清洗濾片或者更換濾片。還有一種可能就是大分子進入了色譜柱里面，導致色譜柱柱頭污染。如果柱效降低或者色譜峰變形，那么可能回事柱頭塌陷或者死體積過大。

　　12、在液相色譜儀完成分離分析工作之后，不應立即停機，需及時對液相色譜儀分析系統(tǒng)進行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質。