轉(zhuǎn)膜儀是用來轉(zhuǎn)印蛋白的儀器。電泳轉(zhuǎn)印為轉(zhuǎn)移蛋白Z常用的方法,該技術(shù)有效、迅速,并且使得蛋白在凝膠中保持高分辨率。在凝膠中向印跡膜載體轉(zhuǎn)印分離的蛋白質(zhì)的過程,即是電泳轉(zhuǎn)印法。因?yàn)榇思夹g(shù)往膜上轉(zhuǎn)印蛋白GX、快速和準(zhǔn)確,并且能夠使得蛋白在凝膠中保持高分辨率。,因此在轉(zhuǎn)移印跡技術(shù)中得到廣泛的應(yīng)用。
注意事項(xiàng):
1.緩沖液的準(zhǔn)備非常重要。除非另有說明,否則請(qǐng)勿通過添加酸或堿來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移緩沖液ph。 緩沖液的準(zhǔn)備不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致過熱和安全隱患。 僅使用優(yōu)質(zhì)試劑等級(jí)甲醇。 污染的甲醇可導(dǎo)致轉(zhuǎn)移緩沖液電導(dǎo)率增加,以及大分子的轉(zhuǎn)移不良。

2.電泳后,在轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡凝膠。 平衡有助于去除電泳緩沖液和去污劑。如果不去除鹽,它們將增加轉(zhuǎn)移緩沖液的電導(dǎo)率和轉(zhuǎn)移過程中產(chǎn)生的熱量。 同樣,低百分比的凝膠(<12%丙烯酰胺)會(huì)在含甲醇的緩沖液中收縮。 平衡允許凝膠在電泳轉(zhuǎn)移之前調(diào)節(jié)至其Z終尺寸。平衡所需的時(shí)間長短取決于凝膠厚度。 例如,對(duì)于0. 75 mm SDS-PAGE凝膠,需要15分鐘。低分子量大分子10,000道爾頓)可能更容易從凝膠中擴(kuò)散出來。通過在電泳過程中多次改變預(yù)平衡緩沖液,可以允許適當(dāng)?shù)哪z預(yù)平衡。 預(yù)平衡期相對(duì)較短。 這將有助于限制低分子量大分子的擴(kuò)散,同時(shí)提供有效的減鹽效果。
3.將膜切成凝膠尺寸。 將膜以45度角緩慢滑入轉(zhuǎn)移緩沖液中并使其濕潤浸泡15-30分鐘。 膜的完全潤濕對(duì)于確保適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合非常重要。 突然潤濕會(huì)導(dǎo)致氣泡滯留在基質(zhì)中,這些氣泡會(huì)阻止轉(zhuǎn)移分子。 為避免膜污染,處理膜時(shí)請(qǐng)始終使用鑷子或戴手套。
4.將濾紙切成凝膠尺寸。 兩張超厚濾紙(或四張厚紙或六張紙,每個(gè)凝膠/膜三明治都需要每種凝膠都需要濾紙)。 通過浸入轉(zhuǎn)移緩沖液完全浸透濾紙。
5、請(qǐng)勿在本儀器上顛倒極性,否則會(huì)導(dǎo)致不銹鋼陰極腐蝕和生銹。 如果發(fā)生這種情況,則應(yīng)使用溫和的磨蝕性清潔劑清潔不銹鋼以去除銹跡。
6.用本儀器不要超過25V。這可能會(huì)損壞電極。
7.除非另有特別說明,否則請(qǐng)勿調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移緩沖液的pH值。 請(qǐng)仔細(xì)按照說明進(jìn)行操作。 如果未指示,則調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移緩沖液的pH值將導(dǎo)致增加緩沖液的電導(dǎo)率。 這表現(xiàn)為電源電流表顯示的初始電流輸出高于預(yù)期。 監(jiān)控每次運(yùn)行之前,請(qǐng)使用200/20型電源提供緩沖電阻,以確保適當(dāng)?shù)木彌_電導(dǎo)率。
8.不建議長時(shí)間轉(zhuǎn)移。 請(qǐng)勿使本儀器保持連接狀態(tài)。 在半干印跡過程中,焦耳熱會(huì)迅速產(chǎn)生。 傳輸時(shí)間超過2小時(shí)會(huì)損壞本機(jī)。
9.電源要求。 Trans-Blot SD單元只能與微處理器控制的200 / 2.0型電源或1000/500型電源一起使用。
10.請(qǐng)勿在超過50℃的環(huán)境溫度下操作該儀器。
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