核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動(dòng)完成的儀器。其在環(huán)境微生物檢測(cè)、食品安全檢測(cè)、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、疾病控制ZX、臨床疾病診斷、生物學(xué)研究以及畜牧業(yè)等多種領(lǐng)域得到廣泛地應(yīng)用。下面就讓小編帶你了解一下提取RNA步驟。

步驟

⒈樣品的制備 

如果樣品多糖、脂肪、蛋白質(zhì)或細(xì)胞外物質(zhì)，可能需要額外的分離步驟，勻漿后，在2-8攝氏度下以12000 ×g的離心力離心10min,將勻漿中不溶解的物質(zhì)移除，高分子量DNA、多糖和細(xì)胞外膜包含于余下的沉淀中，而RNA包含于上層的超浮游物中。在來自于脂肪組織的樣品中，在Z上層有大量的脂肪漂浮，所以應(yīng)當(dāng)將其去除。在干凈的試管中移入清亮的勻漿溶液，然后將氯仿加入，并且繼續(xù)之后的分離步驟。

2.分離

在15-30攝氏度下，孵育勻漿樣品5min,從而完全分解蛋白體。每毫升TRIZOL將0.2 ml氯仿加入。將樣品管蓋蓋緊，將試管用力搖晃15s并且在30攝氏度下將其孵育2-3min中。在2-8攝氏度下以不高于12000 ×g的離心力高速冷凍離心15min。離心后，混合物分為上層無色的水樣層、中間層以及下層紅色的苯酚-氯仿層三層。RNA在水樣層中，所加TRIZOL容量的60%左右為水樣層的容量。

3.沉淀 RNA

在干凈的試管中移入水樣層轉(zhuǎn)移，若要進(jìn)行DNA和蛋白的分離，需要保留有機(jī)層。通過混合異丙醇和水樣層來使RNA沉淀。Z開始勻漿化時(shí)，1毫升TRIZOL對(duì)應(yīng)0.5毫升異丙醇。在15-30攝氏度下孵育混合的樣品10min，并且在2-8攝氏度下以不高于12000 ×g的離心力高速冷凍離心10min。離心前RNA沉淀一般不可見，離心后，在試管壁和管底附著形成的膠狀片狀沉淀。

4 .洗脫 RNA

將上層懸液移去，RNA沉淀使用75%的乙醇洗滌一次，1毫升TRIZOL至少加1毫升75%的乙醇。將混合樣品旋渦振，并且在2-8攝氏度下以不高于7500 ×g的離心力高速冷凍離心5min。

⒌ 再溶解RNA

Z后，將RNA沉淀簡(jiǎn)單干燥，RNA的離心干燥要在真空管里進(jìn)行。特別重要的是，不要完全干燥RNA沉淀，那樣會(huì)導(dǎo)致它的可溶性極大地降低。將RNA樣品部分溶解（A260/280比值< 1.6），分幾次使用移液管移取無RNA酶的水或0.5% SDS溶液來進(jìn)行RNA的溶解，并且在55-60下孵育10min，1**%甲酰胺（除去離子）可以溶解RNA，并且在–70攝氏度下保存。