透明質(zhì)酸，又被稱為玻尿酸，是一種由 N - 乙酰氨基葡萄糖和 D - 葡萄糖醛酸組成的天然高分子粘多糖。它廣泛存在于人體的眼玻璃體、關(guān)節(jié)、臍帶、皮膚等部位，是細胞外基質(zhì)的重要成分，具有獨特的保水性、潤滑性、黏彈性和良好的生物相容性。

透明質(zhì)酸的應(yīng)用

透明質(zhì)酸應(yīng)用范圍非常廣泛，比如作為眼部粘彈劑應(yīng)用于人工晶體植入手術(shù)，保護眼內(nèi)組織，提高手術(shù)成功率；作為骨科填充劑用于骨性關(guān)節(jié)炎和類風濕性關(guān)節(jié)炎等關(guān)節(jié)手術(shù)，緩解疼痛，改善關(guān)節(jié)功能；在創(chuàng)傷治 療方面，還可促進皮膚傷口愈合，預(yù)防術(shù)后粘連，加速組織修復(fù)。

此外，透明質(zhì)酸還廣泛應(yīng)用于醫(yī)療美容領(lǐng)域，比如作為注射填充材料，達到面部除皺、塑形、豐唇等效果，讓肌膚煥發(fā)年輕光彩。也可作為化妝品的重要成分，起到深層補水鎖水，改善膚質(zhì)，提升肌膚彈性和光澤度的作用。

透明質(zhì)酸的分析和檢測

透明質(zhì)酸領(lǐng)域主要的遵循的標準和指導(dǎo)原則有：

YY/T 1571-2017 組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品 透明質(zhì)酸鈉

YY/T 0962-2021 整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠

YY/T 0308-2015 醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠

透明質(zhì)酸鈉類面部注射填充材料非臨床注冊申報資料基本要求

透明質(zhì)酸鈉類面部注射填充材料注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

根據(jù)上述法規(guī)中規(guī)定的各項檢測要求，安捷倫開發(fā)了針對透明質(zhì)酸分析檢測的完整解決方案，涵蓋紅外鑒別、透明質(zhì)酸含量、紫外吸收、分子量及分布系數(shù)、蛋白質(zhì)含量、重金屬含量、乙醇殘留量、交聯(lián)劑殘留量、游離透明質(zhì)酸含量等多個項目，提供一站式分析儀器服務(wù)，為透明質(zhì)酸檢測實驗室保駕護航。以下為部分分析方案展示：

1、透明質(zhì)酸分子量和分布系數(shù)測定

透明質(zhì)酸根據(jù)聚合程度的不同，分子量從 5K 到 20M Da 不等。不同分子量透明質(zhì)酸表現(xiàn)出不同的物理學和生物學特性，可用于不同的應(yīng)用場景，醫(yī)美常用的透明質(zhì)酸，分子量多在 1000K Da 以上。

圖 1. 透明質(zhì)酸分子式

使用 Agilent SUPREMA 色譜柱搭配 GPC/SEC-MALS 可以對透明質(zhì)酸進行分子量和質(zhì)量分布分析，該色譜柱具有優(yōu)化的填料粒徑和孔徑，可提供穩(wěn)定的分離和可靠的結(jié)果。該方法的優(yōu)勢在于可獲得絕 對摩爾質(zhì)量，而帶濃度檢測器的傳統(tǒng) GPC/SEC 則只能提供表觀摩爾質(zhì)量。

圖 2. 透明質(zhì)酸樣品的曲線（紅色：RI - 檢測器曲線（濃度），黑色：實測摩爾質(zhì)量 (MALLS)）

圖 3. 透明質(zhì)酸樣品的摩爾質(zhì)量分布與累積分布

2、透明質(zhì)酸含量測定

在《醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉敷料》法規(guī)的征求意見稿中，給出了用液相色譜法測定透明質(zhì)酸含量的方法，使用 Poroshell Hilic-z 色譜柱搭配 Agilent Infinity 系列 HPLC，可實現(xiàn)透明質(zhì)酸鈉和軟骨素混合樣品酶解溶液的分離和檢測。

圖 4. 透明質(zhì)酸鈉和軟骨素混合溶液酶解后的液相色譜結(jié)果（濃度約 0.025 mg/mL）

3、透明質(zhì)酸產(chǎn)品添加劑檢測

氨基酸在線衍生檢測方案

使用 Agilent Infinity 系列 HPLC 自帶的程序進樣功能，可以實現(xiàn)氨基酸在線衍生和檢測。

圖 5. HPLC 在線衍生法測氨基酸含量

該方案無需額外的軟件或硬件成本，速度快，效率高。此外液相-單四極桿質(zhì)譜還可實現(xiàn)氨基酸的直接檢測，無需衍生，進一步減少步驟和時間。

圖 6. LC-SQ 測氨基酸的典型譜圖及條件

利多卡因檢測方案

醫(yī)美注射劑里常添加利多卡因等麻醉劑，以降低注射過程中的痛感，因此此類產(chǎn)品中的利多卡因定性定量分析也是必不可少的項目。

圖 7.  用 HPLC 測利多卡因和 2,6 - 二甲基苯胺的典型譜圖及條件

4、透明質(zhì)酸交聯(lián)劑殘留量檢測

天然的透明質(zhì)酸結(jié)構(gòu)松散，在這種松散狀態(tài)下，體內(nèi)的半衰期只有 1～2 天。丁二醇縮水甘油醚 (BDDE) 等交聯(lián)劑可以把這些鏈條串聯(lián)起來，讓其形成 3D 網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，從而降低代謝速度，最 終讓其成為理想的填充材料。BDDE 殘留量的檢測通常使用氣相方法：

5、工藝雜質(zhì)分析

透明質(zhì)酸鈉生產(chǎn)和加工過程中，可能會有工藝雜質(zhì)的殘留。下述實驗在 1260 Infinity  II + 1290 ELSD 液相系統(tǒng)上，采用 Poroshell 120 HILIC-5OH 色譜柱在 HILIC 模式下開用了針對多種工藝雜質(zhì)在交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠樣品中的殘留含量的分析方法，靈敏度滿足用戶檢測定量要求（40 ppm，即主成分含量的 0.2%）。

圖 8. HPLC 1260 + ELSD 檢測器測透明質(zhì)酸樣品中的工藝雜質(zhì)譜圖

采用通用型檢測器 1290 ELSD 不僅可以檢測到雜質(zhì)成分同時也可以看到對應(yīng)的鹽離子，可作為輔助參考。從終產(chǎn)品樣品峰與氯化鈉的疊加色譜圖和樣品配制信息來看，樣品中的基質(zhì)峰應(yīng)該主要來自于氯化鈉溶液和磷酸溶液，即氯離子、鈉離子和磷酸根離子，工藝雜質(zhì)可以實現(xiàn)與基質(zhì)峰的基線分離。

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