【概述】

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>快速提取動(dòng)物組織中的總RNA(18S,28S；離心吸附柱不吸附5S)

【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】

實(shí)驗(yàn)器材及試劑：研磨儀，離心管，移液槍，電泳槽凝膠成像等；無(wú)水乙醇，液氮，瓊脂糖。

實(shí)驗(yàn)材料：雞肉組織。

圖為凈信全自動(dòng)樣品快速研磨儀

【實(shí)驗(yàn)/操作方法】

1）雞肉組織
2）鮮組織用解剖刀迅速切成小碎離心管中，加入小號(hào)研磨珠，將管子蓋嚴(yán)后放入液氮中冷凍，設(shè)置參數(shù)，點(diǎn)擊運(yùn)行即可開(kāi)始研磨。
3）取適量組織細(xì)粉轉(zhuǎn)入裝有組織裂解液RLT的離心管中,用手劇烈振蕩若干秒，充分裂解。用帶鈍針頭的一次性注射器抽打裂解物若干次或直到得到滿意勻漿結(jié)果(或者電動(dòng)勻漿若干秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產(chǎn)量。
4）將勻漿后裂解物離心,沉淀可能存在的裂解困難的碎片或者不溶物,將裂解物上清小心轉(zhuǎn)到一個(gè)新離心管。
5）接操作步驟項(xiàng)下3。
6）較精估計(jì)裂解物(上清)體積,加入等體積的乙醇（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!）,此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過(guò)程,立即吹打混勻,不要離心。
7）立刻將混合物加入一個(gè)吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）離心60秒，棄掉廢液。
8）加去蛋白液RW1，室溫放置幾秒，離心30秒，棄掉廢液。
9）如果DNA殘留明顯,可在加入RW1后室溫放置幾分鐘再離心。
10）加入漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!），離心30秒，棄掉廢液。加入漂洗液RW,重復(fù)一遍。
11）將吸附柱RA放回空收集管中離心2分鐘，盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇YZ下游反應(yīng)。
12）取出吸附柱RA，放入一個(gè)RNase free離心管中，根據(jù)預(yù)期RNA產(chǎn)量在吸附膜的中間部位加30-50μl RNase free water，室溫放置1分鐘，離心1分鐘。
13）如果預(yù)期RNA產(chǎn)量>30μg,加30-50μl RNase free water重復(fù)步驟8,合并兩次洗脫液,或者使用洗脫液加回到吸附柱重復(fù)步驟一遍(如果需要RNA濃度高)。
14）洗脫兩遍的RNA洗脫液濃度高,分兩次洗脫合并洗脫液的RNA產(chǎn)量比前者高15–30%,但是濃度要低,用戶根據(jù)需要選擇。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果/結(jié)論】

提取的雞肉組織RNA點(diǎn)樣量為1ul，雞肉組織RNA兩個(gè)條帶亮度相當(dāng)，提示出現(xiàn)降解。如下圖所示：