【概述】熒光定量PCR(qPCR)方法用途及說(shuō)明

　　熒光定量PCR法(qPCR)：是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，將『針對(duì)支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記，使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號(hào)的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，簡(jiǎn)稱qPCR。

　　(經(jīng)典法)

　　1) 符合歐洲藥典、藥典要求，更適合細(xì)胞，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項(xiàng)目申報(bào)和質(zhì)檢。

　　2)樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。

　　3) 廠家可協(xié)助完善方法驗(yàn)證步驟。

【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】支原體熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)試劑盒(一步法)

　　1)適合科研單位檢測(cè)，或單位內(nèi)檢，用熒光定量PCR(qPCR)法檢測(cè)細(xì)胞或其他生物基質(zhì)。

　　2) 比藥典操作標(biāo)準(zhǔn)合并了一步，(將內(nèi)控對(duì)照試劑預(yù)先混合在PCR mix試劑中)，操作更簡(jiǎn)潔。

　　3)樣本量為2μl，靈敏度為50個(gè)基因組拷貝/反應(yīng)。結(jié)果準(zhǔn)確。

【樣品提取】

【實(shí)驗(yàn)/操作方法】?jī)?yōu)點(diǎn)：

　?、凫`敏度高、特異性強(qiáng)。

　?、跁r(shí)間短，2-3小時(shí)出結(jié)果。

　?、蹤z測(cè)結(jié)果可定量。

　?、懿僮骱?jiǎn)便。

　　缺點(diǎn)：

　?、賹?duì)于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。(可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證)

　?、诓煌瑥S家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)不同)，需謹(jǐn)慎選擇，盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果/結(jié)論】

【儀器/耗材清單】試劑盒  PCR耗材