7.2 GX液相色譜測定 7.2.1 流動相 溶劑A：酸性水溶液（165ml乙酸溶于1000ml水中） 溶劑B：乙腈 7.2.2 梯度洗脫 時間 溶劑A％ 溶劑B％ 梯度曲線 0 30 70 線性 20.0 5 95 線性 30.0 0 100 線性 42.0 0 100 流速:0.7ml/min 基線穩(wěn)定后開始進樣 兩次進樣間隙時間為10分鐘 7.2.3 進樣量:10l 7.2.4檢測波長 在300nm到600nm波長范圍進行掃描,確定三個測定波長（432nm,478nm和520nm） 7.2.5 標準曲線 用5個標準工作溶液的測定值繪制標準曲線,各種色素的標準曲線分別在Zda吸收波長處由5點回歸計算（蘇丹橙B在432nm波長有Zda吸收，蘇丹紅1號, 蘇丹紅2號和胭脂樹橙在478nm波長有Zda吸收和蘇丹紅3號，蘇丹紅4號和蘇丹紅B在520nm波長有Zda吸收） 將7.1制好的樣過0.45m的膜裝入自動進樣器的小瓶后進行液相色譜測定得到結(jié)果 標準回歸曲線經(jīng)過每次實驗配制的系列標準溶液測定結(jié)果的驗證 7.3 計算 著色劑含量按以下公式計算： R=C×V×D/M 單位：mg/kg C-樣品中待測組分的濃度,單位：g/ml M-檢測樣品取樣量（g） V-樣品溶液體積（ml） D-樣品溶液的稀釋倍數(shù) 8 蘇丹紅1號 8.1 **步是確定方法的操作條件 應用Norm NF V03 110 獲得以下操作條件： 標準曲線模型是線性的 478nm下的檢測限是0.013g/ml 478nm下定量的Zdi濃度為：0.106g/ml 在辣椒粉樣品中的添加回收率高于90% 對于其它食品基質(zhì)中的色素方法也進行了研究并可應用類似方法對所有著色劑進行檢測 8.2 應用LC/MS確證蘇丹紅1號 對于復雜食品基質(zhì)本底或一種新的基質(zhì)本底，確證蘇丹紅1號分子的存在是非常必要的 如果光譜分析結(jié)果不令人滿意（如待分析物濃度較低或可能存在結(jié)構(gòu)類似物時）也可以應用這種技術(shù)進行確證 8.3 設備 8.3.1 液相色譜與電噴霧離子化質(zhì)譜儀聯(lián)用 8.3.2 色譜柱：PHENOMENEX LUNA C18 3m 150×2nm 8.3.3 柱溫箱溫度調(diào)至30 8.4 HPLC測定 8.4.1 流動相 溶劑A:20%酸性水溶液(0.1%乙酸溶液) 溶劑B:80%乙腈 流速:0.2ml/min 8.4.2 進樣量:10l 8.4.3 檢測器 正電噴霧 設定條件: 噴霧電壓:5300V 噴霧口電壓:120V 周邊電壓:9.50V 輔助氣體溫度:300 8.4.4 測定 步驟7.12取得的提取物先稀釋10倍后再稀釋100倍后經(jīng)0.45膜過濾于自動進樣瓶中. 8.5 結(jié)果 樣品中蘇丹紅1號組分與樣準品出峰時間基本一致相對誤差為5%,并經(jīng)質(zhì)譜檢測由m/Z為249和1022的離子定性