1.適用范圍 本方法適用于出口茶葉中黃曲霉毒素B1含量的檢驗 2.原理概要 樣品用提取，提取液經(jīng)硅膠柱凈化，凈化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有熒光檢測器的GX液相色譜儀測定，外標法定量 3.主要試劑和儀器 3.1.主要試劑 ； 正己烷； 苯； 甲醇：紫外光譜級； 乙腈：紫外光譜級； 三氟乙酸； 乙腈-水溶液（1＋1）； -甲醇溶液（95＋5）； 苯-乙腈溶液（98＋2）； 黃曲霉毒素B1標準品：純度99%； 黃曲霉毒素B1標準溶液：準確稱取適量的黃曲霉毒素B1標準品，以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中，配成濃度為10g/mL標準貯備液根據(jù)需要，再配成適當濃度的標準工作溶液 3.2.儀器 GX液相色譜儀，配有熒光檢測器； 天津恒奧硅膠小柱； 天津恒奧振蕩器：HMS系列； 天津恒奧超聲波：HUHS系列； 天津恒奧氮吹儀； 天津恒奧濾膜：有機系用，0.45m； 天津恒奧微孔濾膜過濾器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器； 微量注射器； 離心管：5mL具塞磨口； 粉碎機 4.試樣的抽取與制備 4.1.抽樣方法 從整批產(chǎn)品堆垛的上下不同部位隨機抽取2.2規(guī)定的件數(shù)，逐件開啟分別倒出全部茶葉于塑料布上，用取樣鏟從每件中各取出有代表性的樣品約500g將所取樣品充分混勻，用四分法或分樣器逐步縮分出500g，裝入潔凈密封的樣品筒內(nèi)，加封后，標明標記，及時送實驗室 4.2.試樣制備 將所取回樣品全部磨碎，通過20目篩，混勻，均分成兩份試樣，裝入潔凈容器內(nèi)，密封，標明標記 4.3.試樣保存 將試樣于室溫下保存 注：在抽樣和制樣的操作過程中，必須防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化 5.過程簡述 5.1.提取 稱取試樣5.0g（極ng確到0.1g）置于100mL具塞錐形燒瓶中，加入15mL，于振蕩器上提取30min，然后經(jīng)墊有玻璃纖維的漏斗過濾收集濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的具尾管圓底燒瓶內(nèi)，并用洗滌濾渣，收集濾液至約20mL 5.2.凈化 用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將上述濾液在50水浴中濃縮至約1mL，經(jīng)0.45m濾膜過濾后，注入硅膠小柱中用2～4mL正己烷洗滌燒瓶后淋洗小柱，棄去流出液然后用3～4mL-甲醇溶液以每秒鐘2滴的流速洗脫，收集洗脫液于離心管中用氮氣儀緩緩吹干，供衍生用 5.3.衍生 5.3.1.試樣 加200L正己烷和50L三氟乙酸于上述離心管中，蓋緊磨口塞，超聲振蕩1min，靜置10min，用氮吹儀緩緩至干用乙腈-水溶液（1＋1）定容至1.0mL，超聲1min，用0.5m濾膜過濾，濾液供液相色譜用 5.3.2.標準工作溶液 取1.0mL標準工作溶液，用氮吹儀緩緩吹干，按5.3.1步驟操作 5.4.測定 5.4.1.色譜條件 色譜柱：NOVA PAKc18，300mm×3.9mm（內(nèi)徑）； 流動相：甲醇-水溶液（42＋58）； 流速：0.8mL/min； 熒光檢測器：激發(fā)波長375 nm，發(fā)射波長425 nm； 色譜柱溫度：室溫 5.4.2.測定 根據(jù)樣液中黃曲霉毒素B1的含量情況，選定峰高相近的標準工作溶液標準工作溶液和樣液中黃曲霉毒素B1衍生物的響應值均應在儀器檢測線性范圍內(nèi)對標準工作溶液和樣液的衍生物溶液等體積參插進樣測定在上述色譜條件下，黃曲霉毒素B1衍生物保留時間約為8min 5.4.3.空白試驗 除不加試樣外，按上述測定步驟進行 6.結(jié)果計算 用色譜數(shù)據(jù)處理機進行數(shù)據(jù)處理 7.低限和回收率測定 7.1.低限 本方法的測定低限為0.001mg/kg 7.2.回收率 回收率的實驗數(shù)據(jù)：黃曲霉毒素B1的添加濃度在0.001～0.5mg/kg范圍內(nèi)，回收率為89.1%～104.9% 由上表可以看出：使用天津恒奧設備處理樣品，可以得到預期的結(jié)果