western blot失敗經(jīng)驗總結(jié) western blot失敗經(jīng)驗總結(jié)我做了很久的WB，Zda的一個難點感覺在于樣品制備上！蛋白的降解有些時候是你想象不到的，可能出奇的糟 western blot失敗經(jīng)驗總結(jié)我做了很久的WB，Zda的一個難點感覺在于樣品制備上！蛋白的降解有些時候是你想象不到的，可能出奇的糟糕，也可能完全沒事~~如果單獨做WB的話，感覺以快速徹底裂解，先變性后保存的原則比較有效，盡量選擇足夠強的裂解液，甚至直接給loading buffer裂解，然后取出部分蛋白定量，其余加入loading buffer100度充分變性，再分裝保存有些時候比蛋白酶YZ劑更有效 另一個感覺就是樣品中目的蛋白的量，限于WB的檢測下限問題，一般目的蛋白量**別低于1ng（雖然ECL法下限是0.1ng，即100pg），**在10ng以上為好這就要求在做WB之前必須充分考慮目的蛋白的可能豐度，**充分的準備工作然后再設(shè)計細胞量或者組織量，千萬別把樣品搞稀了，否則就不好辦了 Z后，還是多看文獻，在做某個蛋白之前**看看別人是如何做的，有什么特殊要求，內(nèi)參如何選等等