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冰凍切片彈性纖維(ELASTIC)馬森(MASSON)染色試劑盒

本文由 上海科學儀器有限公司 整理匯編

2018-11-18 10:00 993閱讀次數(shù)

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冰凍切片彈性纖維(ELASTIC)馬森(MASSON)染色試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途冰凍切片彈性纖維(ELASTIC)馬森(MASSON)染色試劑是一種旨在使用標準化的化學脫蠟方法和偉郝夫(Verhoeff)蘇木素以及三色染料(trichrome),分析和區(qū)分冰凍組織切片中的彈性纖維的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實驗證明的。廣泛用于結(jié)締組織、肌肉組織和纖維蛋白的研究等。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰。技術(shù)背景彈性纖維(elasticfiber),又稱為黃色纖維(yellowfiber),是固有結(jié)締組織(Connectivetissueproper)細胞外基質(zhì)的成分之一,由平滑肌細胞和成纖維細胞產(chǎn)生彈力蛋白質(zhì)(elastin)、原纖維蛋白(fibrillin;FBN)等構(gòu)成。彈性纖維具有可伸展性。存在于皮膚、肺、動脈、靜脈、彈力軟骨、牙周韌帶(periodontalligament)、脂肪組織中。彈性纖維缺失導致皮膚松弛癥(cutislaxa)、威廉姆斯綜合征(WilliamsSyndrome)等疾病?;谀α_利(mallory)S次應(yīng)用三色系統(tǒng)的方法,馬森(masson)進行了改良,在三色復(fù)合染料體系中,使用苯胺籃(anilineblue)替代綠籃。同時使用偉郝夫(Verhoeff)蘇木素選擇性染色彈性纖維,三色復(fù)合染料幫助區(qū)別其它包括肌肉、膠原纖維、纖維蛋白(fibrin)等組織成分。馬森方法操作復(fù)雜,可以細致區(qū)分多種組織成分。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)200毫升固著液(ReagentB)10毫升韋格液(ReagentC)100毫升祛色液(ReagentD)20毫升岑克液(ReagentE)100毫升范氏液(ReagentF)10毫升比氏液(ReagentG)10毫升酸性液(ReagentH)10毫升染色液(ReagentI)10毫升修正液(ReagentJ)10毫升脫水液A(ReagentK)10毫升脫水液B(ReagentL)10毫升透明液(ReagentM)10毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在4℃冰箱里,避免光照;試劑具有腐蝕性,注意安全;有效保證6月用戶自備小型玻璃染色缸:用于組織或切片處理的容器培養(yǎng)箱或烘箱:用于樣品反應(yīng)孵育微波爐:用于樣品反應(yīng)孵育處理中性樹脂:用于切片封片光學顯微鏡:用于切片染色后觀察分析實驗步驟一、樣品固著處理1.準備好5微米厚的冰凍切片2.小心加上200微升清理液(ReagentA)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面3.室溫下孵育2分鐘4.小心移去切片上的清理液(ReagentA)5.小心加上200微升固著液(ReagentB)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面6.室溫下孵育5分鐘7.小心移去切片上的固著液(ReagentB)8.小心加上200微升清理液(ReagentA)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面9.室溫下孵育2分鐘10.小心移去切片上的清理液(ReagentA)二、樣本染色處理操作一:標準染色1.小心加入1毫升韋格液(ReagentC)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面2.放進60℃恒溫培養(yǎng)箱孵育60分鐘3.小心移去韋格液(ReagentC)4.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘5.小心移去切片上的清理液(ReagentA)6.小心加入200微升祛色液(ReagentD)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面7.室溫下孵育5分鐘8.小心移去祛色液(ReagentD)9.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘10.小心移去切片上的清理液(ReagentA)11.小心加入1毫升岑克液(ReagentE)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面12.放進60℃恒溫培養(yǎng)箱孵育60分鐘13.小心移去岑克液(ReagentE)14.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘15.小心移去切片上的清理液(ReagentA)16.小心加入200微升范氏液(ReagentF)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面17.室溫下孵育30分鐘18.小心移去范氏液(ReagentF)19.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘20.小心移去切片上的清理液(ReagentA)21.小心加入200微升祛色液(ReagentD)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面22.室溫下孵育5分鐘23.小心移去祛色液(ReagentD)24.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘25.小心移去切片上的清理液(ReagentA)26.小心加入200微升比氏液(ReagentG)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面27.室溫下孵育5分鐘(注意:可以延長至15分鐘,增強染色效果)28.小心移去比氏液(ReagentG)29.小心加入200微升清理液(ReagentA)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面30.小心移去切片上的清理液(ReagentA)31.重復(fù)實驗步驟29至30二次32.小心加入200微升酸性液(ReagentH)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面(注意:可以孵育15分鐘,增強染色效果)33.小心移去切片上的酸性液(ReagentH)34.小心加上200微升染色液(ReagentI)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面35.室溫下孵育5分鐘,避免光照(注意:可以延長至15分鐘,增強染色效果)36.小心移去切片上的染色液(ReagentI)37.小心加上200微升修正液(ReagentJ)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面38.室溫下孵育2分鐘39.小心移去切片上的修正液(ReagentJ)40.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘41.小心移去切片上的清理液(ReagentA)42.(選擇步驟)小心加上200微升脫水液A(ReagentK)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面(注意:如果比氏液(ReagentG)染色過深,建議使用由此步驟開始的選擇步驟,并快速操作)43.(選擇步驟)小心移去切片上的脫水液A(ReagentK)44.(選擇步驟)小心加上200微升脫水液B(ReagentL)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面45.(選擇步驟)小心移去切片上的脫水液B(ReagentL)46.(選擇步驟)小心加上200微升透明液(ReagentM)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面47.(選擇步驟)小心移去切片上的透明液(ReagentM)48.放上蓋玻片或封片(中性樹脂)49.即刻在一般光學顯微鏡下觀察:彈性纖維――呈現(xiàn)黑色細胞核――呈現(xiàn)黑色細胞質(zhì)――呈現(xiàn)紅色肌纖維――呈現(xiàn)紅色角蛋白――呈現(xiàn)紅色膠原纖維――呈現(xiàn)藍色操作二:熱處理染色1.準備3個50毫升燒杯或小型染色缸,分別加入50毫升清理液(ReagentA)、韋格液(ReagentC)和岑克液(ReagentE)2.小心放進上述固著處理的切片到50毫升韋格液(ReagentC)小型染色缸里3.放進微波爐(600瓦)加熱45秒4.小心移去切片上的韋格液(ReagentC)5.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘6.小心移去切片上的清理液(ReagentA)7.小心加入200微升祛色液(ReagentD)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面8.室溫下孵育5分鐘9.小心移去祛色液(ReagentD)10.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘11.小心移去切片上的清理液(ReagentA)12.小心將切片置入50毫升岑克液(ReagentE)小型染色缸里13.放進微波爐(600瓦)加熱60秒14.小心移去岑克液(ReagentE)15.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘16.小心移去切片上的清理液(ReagentA)17.小心加入200微升范氏液(ReagentF)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面18.室溫下孵育30分鐘19.小心移去范氏液(ReagentF)20.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘21.小心移去切片上的清理液(ReagentA)22.小心加入200微升祛色液(ReagentD)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面23.室溫下孵育5分鐘24.小心移去祛色液(ReagentD)25.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘26.小心移去切片上的清理液(ReagentA)27.小心加入200微升比氏液(ReagentG)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面28.室溫下孵育5分鐘(注意:可以延長至15分鐘,增強染色效果)29.小心移去比氏液(ReagentG)30.小心加入200微升清理液(ReagentA)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面31.小心移去切片上的清理液(ReagentA)32.重復(fù)實驗步驟30至31二次33.小心加入200微升酸性液(ReagentH)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面34.室溫下孵育10分鐘(注意:可以延長至15分鐘,增強染色效果)35.小心移去切片上的酸性液(ReagentH)36.小心加上200微升染色液(ReagentI)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面37.室溫下孵育5分鐘,避免光照(注意:可以延長至15分鐘,增強染色效果)38.小心移去切片上的染色液(ReagentI)39.小心加上200微升修正液(ReagentJ)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面40.室溫下孵育1分鐘41.小心移去切片上的修正液(ReagentJ)42.室溫下,小心將切片置入50毫升清理液(ReagentA)中孵育2分鐘43.小心移去切片上的清理液(ReagentA)44.(選擇步驟)小心加上200微升脫水液A(ReagentK)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面(注意:如果比氏液(ReagentG)染色過深,建議使用由此步驟開始的選擇步驟,并快速操作)45.(選擇步驟)小心移去切片上的脫水液A(ReagentK)46.(選擇步驟)小心加上200微升脫水液B(ReagentL)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面47.(選擇步驟)小心移去切片上的脫水液B(ReagentL)48.(選擇步驟)小心加上200微升透明液(ReagentM)在切片上,鋪滿整個切片樣品表面49.(選擇步驟)小心移去切片上的透明液(ReagentM)50.放上蓋玻片或封片(中性樹脂)51.即刻在一般光學顯微鏡下觀察:彈性纖維――呈現(xiàn)黑色細胞核――呈現(xiàn)黑色細胞質(zhì)――呈現(xiàn)紅色肌纖維――呈現(xiàn)紅色角蛋白――呈現(xiàn)紅色膠原纖維――呈現(xiàn)藍色注意事項1.本產(chǎn)品為50次操作2.操作時,須戴手套3.試劑具有腐蝕性,注意操作安全4.建議使用玻璃染色缸5.每次更換試劑溶液時,保持切片面基本晾干6.試劑溶液在切片表面時,避免有氣泡存在,同時確保鋪滿切片表面7.整個操作,在避光狀態(tài)下進行8.染色完成后,即刻進行光學顯微鏡觀察9.樣品染色后保存,避免光照10.本公司提供系列特定組織染色試劑產(chǎn)品質(zhì)量標準1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

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