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植物細(xì)胞培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件

本文由 上海研生實(shí)業(yè)有限公司 整理匯編

2024-10-03 20:15 1849閱讀次數(shù)

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植物細(xì)胞培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的組成對(duì)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝物質(zhì)的生產(chǎn)影響極大。典型的培養(yǎng)基有Murashige-Skoog(MS),Linsmaier-Skoog(LS),white和B5等四種。無(wú)機(jī)鹽類:在無(wú)機(jī)鹽中,磷酸根及氮源(NH4+或N03-)的含量對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)與物質(zhì)生產(chǎn)有明顯的影響。另外,一些金屬離子如Ca2+、Cu2+、Mg2+等的含量往往也有重要影響。---碳源:通常使用2―3%的蔗糖作碳源,也有使用葡萄糖或果糖。使用單糖的優(yōu)點(diǎn)是方便分析測(cè)定,且有助于細(xì)胞生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)分析。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì):植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝物質(zhì)生產(chǎn)的影響十分大。它可分為兩大類:植物生長(zhǎng)素類有2,4―D(二氯苯氧基乙酸)、IAA(吲哚基醋酸)、NAA(萘乙酸)等,細(xì)胞激動(dòng)素類有BA(芐基腺凜吟)、動(dòng)力精和玉米素。其他因素:植物細(xì)胞培養(yǎng)的影響因素還有培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)氣相組成(CO2和乙烯含量)、前體物質(zhì)、氨基酸、維生素及誘導(dǎo)劑等。培養(yǎng)條件溫度:培養(yǎng)溫度對(duì)植物細(xì)胞生長(zhǎng)及二次代謝產(chǎn)物生成有重要影響。通常,植物細(xì)胞培養(yǎng)采用25℃。攪拌:在搖瓶實(shí)驗(yàn)中,通常搖床的轉(zhuǎn)速取90―120r/min。pH值:通過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)行的H+離子傳遞對(duì)細(xì)胞的生育環(huán)境、生理活性來(lái)說(shuō)無(wú)疑是重要的。在培養(yǎng)過(guò)程中,通常pH作為一個(gè)重要參數(shù)被控制在一定范圍內(nèi)。植物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH值一般為5―6。通氣:通氣是細(xì)胞液體深層培養(yǎng)重要的物理化學(xué)因子。好氣培養(yǎng)系統(tǒng)的通氣與混合及攪拌是相互關(guān)聯(lián)的。對(duì)搖瓶試驗(yàn),通常500m1的三角瓶?jī)?nèi)裝80―200m1的植物細(xì)胞培養(yǎng)液較適宜。當(dāng)然,氣液傳質(zhì)還與瓶塞的材料有關(guān)。試驗(yàn)表明,從溶氧速率考慮,以棉花塞**,微孔硅橡膠塞次之,鋁箔塞Z差。光:光對(duì)植物有著特殊的作用。光照射條件不僅通過(guò)光照周期、光的質(zhì)量(即種類、波長(zhǎng))而且通過(guò)光照量(光強(qiáng)度)的調(diào)節(jié)來(lái)影響植物細(xì)胞的生理特性和培養(yǎng)特性。研究表明,光調(diào)節(jié)著細(xì)胞中的關(guān)鍵酶的活性,有時(shí)光能大大促進(jìn)代謝產(chǎn)物的生成,有時(shí)卻起著阻害作用。細(xì)胞齡:在培養(yǎng)過(guò)程的不同時(shí)期,細(xì)胞的生理狀況、生長(zhǎng)與物質(zhì)生產(chǎn)能力差異顯著。而且,使用不同細(xì)胞齡的種細(xì)胞,其后代的生長(zhǎng)與物質(zhì)生產(chǎn)狀況也會(huì)大不一樣。通常,使用處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后期或穩(wěn)定期前期的細(xì)胞作為接種細(xì)胞較合適。接種量:在植物細(xì)胞培養(yǎng)中,接種量也是一個(gè)影響因素。在再次培養(yǎng)中,往往取前次培養(yǎng)液的5―20%作為種液,也以接種細(xì)胞濕重為基準(zhǔn),其接種濃度為15―50g(濕細(xì)胞)/L。由于接種量對(duì)細(xì)胞產(chǎn)率及二次代謝物質(zhì)的生產(chǎn)有一定影響,故應(yīng)根據(jù)不同的培養(yǎng)對(duì)象通過(guò)試驗(yàn),確定其Zda接種量。

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