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蘇木精-伊紅染色使用說明

本文由 上海研生實業(yè)有限公司 整理匯編

2018-11-26 10:00 4020閱讀次數(shù)

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蘇木精-伊紅染色使用說明【試劑配制】蘇木精染液蘇木精配方很多,現(xiàn)介紹常用的是Harris蘇木精染液。蘇木精1g95%乙醇溶液10ml鉀礬或銨礬20g蒸餾水200ml0.5g冰醋酸8.0ml先將蘇木精溶于乙醇溶液。鉀礬加溫溶解燒瓶后,將倒入,繼續(xù)加熱1min。加熱停止后,緩慢加入0.5g,再繼續(xù)加熱煮沸1min。迅速將燒瓶移人冰水內(nèi)。染液冷卻呈深色時,加冰醋酸過濾后即可使用。棕色磨口瓶保存。室溫保存2個月,4℃保存4個月左右。1.0%伊紅染液將1.0g水溶性伊紅溶100ml蒸餾水中,每100ml伊紅液中加0.2ml冰醋酸。【實驗步驟】(1)石蠟片經(jīng)脫蠟、水化,單層細胞片經(jīng)漂洗固定。(2)蘇木素染液染5~10min(染色時間與溫度、染液成熟度有關)。(3)自來水換數(shù)次,標本轉(zhuǎn)為深藍色。(4)分色:浸入1%稀鹽酸乙醇液(100ml75%乙醇溶液中加1d鹽酸)分色數(shù)秒鐘至1min,脫去多余的藍浮色,標本轉(zhuǎn)為淡紫紅色鏡下呈紫紅色,胞質(zhì)無色或灰藍色(后者為幼稚細胞)。(5)藍化:自來水浸洗10min或數(shù)小時,甚至更長,標本從淡紫紅色轉(zhuǎn)為鮮艷的淺藍色。注意:為縮短自來水浸洗時間,使蘇木素更加顯色,可將標本置淡氨水溶液(400ml自來水加氨水2滴)中10min,切片很快呈鮮艷的淺藍色,經(jīng)此處理的標本,要經(jīng)自來水充分浸洗,否則會影響伊紅染色。(6)蒸餾水漂洗。(7)伊紅染液5~10min,進行對比染色。(8)用蒸餾水洗去玻片的浮色,經(jīng)70%、80%、90%梯度乙醇溶液脫水各一次,再分別經(jīng)95%、100%乙醇溶液脫水各兩次,每次1min。(9)浸入二甲苯兩次,每次1min。中性樹膠封片【注意事項】(1)Harris蘇木精染液即配即用,不能久存,宜少量配用。(2)HE染色時,除大批標本采取浸染外,一般以滴染為好。染液反復使用而被水稀釋,使特異性染色和染色速度下降。(3)蘇木精染液出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象,是染液變質(zhì)的一種指示,但濾液仍可使用一段時間。蘇木精染液效力判斷方法為:將蘇木精染液滴人自來水中,若染液出現(xiàn)由紫紅色變?yōu)樗{色的現(xiàn)象,即證實染液有效。(4)蘇木精染色后,鹽酸乙醇溶液分色是關鍵步驟:以細胞核染色清晰、細胞質(zhì)基本無色為佳。核過染,延長分色時間;染色太淺,則應重新染色。(5)伊紅染色后,低濃度乙醇溶液脫水后極易脫色:為防止此現(xiàn)象的發(fā)生,標本脫水至95%乙醇溶液后,再轉(zhuǎn)入95%乙醇溶液配制的1%伊紅液中復染3~5min分鐘,然后繼續(xù)脫水透明,可獲得滿意效果。(6)無水酒精脫水后,轉(zhuǎn)入二甲苯中出現(xiàn)混濁現(xiàn)象,為脫水不徹底的表現(xiàn)。此時應退回乙醇溶液或更換100%乙醇重新脫水。(7)封片時,蓋玻片要大于切片。切片裸露,標本很快褪色。(8)市售95%乙醇溶液常含雜質(zhì),只能用于脫水或清潔玻片。(9)二甲苯是一種易揮發(fā)的有毒液體,實驗者要帶眼罩、口罩、手套,在通風的地方操作。

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