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培養(yǎng)細(xì)胞增殖過程注意事項(xiàng)

本文由 上海研生實(shí)業(yè)有限公司 整理匯編

2024-10-03 20:19 1491閱讀次數(shù)

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培養(yǎng)細(xì)胞增殖過程注意事項(xiàng)體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)在動(dòng)態(tài)平衡環(huán)境中,而組織培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、皿或其它容器,生存空間和營(yíng)養(yǎng)是有限的。當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后,則需要分離出一部分細(xì)胞和更新營(yíng)養(yǎng)液,否則將影響細(xì)胞的繼續(xù)生存,這一過程叫傳代。每次傳代以后,細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖過程都會(huì)受一定的影響。另外,很多細(xì)胞特別是正常細(xì)胞,在體外的生存也不是無限的,存在著一個(gè)發(fā)展過程。所有這一切,使組織細(xì)胞在培養(yǎng)中有著一系列與體內(nèi)不同的生存特點(diǎn)。根據(jù)培養(yǎng)過程中是否需要分割培養(yǎng)物進(jìn)行再培養(yǎng)而將細(xì)胞培養(yǎng)分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。一、原代培養(yǎng)(一)過程原代培養(yǎng)的基本過程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種及培養(yǎng)等步驟。原代培養(yǎng)的方法很多,基本和Z常用的是組織塊培養(yǎng)法和分離細(xì)胞法。1、組織塊培養(yǎng)法(1)基本操作過程1)、用培養(yǎng)液濕潤(rùn)所取組織材料,并用鋒利的眼科剪將附在其上的脂肪和結(jié)締組織去除干凈。再用平衡液(PBS)或Hanks液漂洗;用鋒利的眼科彎剪將組織塊剪成小塊;再用PBS或Hanks液漂洗多次,直至液體不渾濁、無油滴、清亮為止。2)、用濕潤(rùn)的吸管吸取切碎的組織塊,清清吹到培養(yǎng)瓶皿中,并將其按一定間距均勻放在培養(yǎng)瓶底壁上,量不要過多,要將組織塊切面貼在培養(yǎng)瓶底壁上;3)、將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn),使瓶底朝上,在種植了組織塊一側(cè)的對(duì)側(cè)面加足培養(yǎng)液,勿使組織塊與培養(yǎng)液接觸,塞緊瓶塞;4)、將種植了組織塊的一側(cè)朝上,靜置于37℃培養(yǎng)箱中;待組織塊貼壁1h到3h后翻瓶,使貼壁的組織塊浸沒與培養(yǎng)液中,靜置;5)、每隔2到3天更換一次培養(yǎng)液,或者根據(jù)培養(yǎng)瓶種顏色的變化確定換液時(shí)間。2、注意事項(xiàng)1)、組織塊接種后的前3天,從組織塊向外遷徙的細(xì)胞數(shù)很少,組織塊的黏附不牢固,在觀察和移動(dòng)的過程中,注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng),否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。2)、加入的培養(yǎng)液不宜過多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來。3)、用組織塊培養(yǎng)時(shí),要及時(shí)觀察,當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞,因?yàn)橐哑〉慕M織塊和那些細(xì)胞碎片已經(jīng)死亡,它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng),要及時(shí)清除。

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