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  2024-09-13 23:04

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  2024-10-01 12:43

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• ELISA技術(shù)測(cè)定單克隆抗體效價(jià)方法

  1.深入了解ELISA法測(cè)定抗體效價(jià)的原理?！　?.掌握ELISA法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)的方法?！　《?、實(shí)驗(yàn)原理　　ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的GX催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上，形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原，稱(chēng)為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無(wú)和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA試劑盒是免疫酶技術(shù)的一種，其特點(diǎn)是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板（或球）吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應(yīng)和酶促反應(yīng)都在其中進(jìn)行。在每次反應(yīng)后都要反復(fù)洗滌，這既保證了反應(yīng)的定量關(guān)系，也避免了末反應(yīng)的游離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA法中.酶促反應(yīng)只進(jìn)行一次，而抗原、抗體的免疫反應(yīng)可進(jìn)行一次或數(shù)次，即可用二抗（抗抗體）、三抗再次進(jìn)行免疫反應(yīng)。　　目前常用的幾種ELISA方法有：測(cè)定抗體的間接法，測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本實(shí)驗(yàn)采用間接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要過(guò)程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加待測(cè)抗體，保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標(biāo)抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應(yīng)，用目測(cè)或光電比色測(cè)定抗體含量。　　三、儀器、原料和試劑　　儀器　　聚苯乙烯96孔酶標(biāo)板、微量移液管、酶聯(lián)免疫閱讀儀、水浴鍋。　　原料　　單克隆抗體　　試劑　　1.抗原及酶標(biāo)記抗體　?、倏乖和每谷薎gG（RabbitAanti-humanIgG，CodeNo.A0423）;　?、诿笜?biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP（RabbitAnti-mouseIgG-HRP，CodeNo.P0260）;均為　　DAKO公司產(chǎn)品，使用時(shí)按照說(shuō)明書(shū)要求稀釋?！　?.洗滌液（含0.05%Tween20的PBS）：1LPBS中加入Tween-20500μL?！　?.ELISA試劑盒封閉液（含1%牛血清白蛋白，0.1%Tween20的PBS）：10mLPBS中加入100mgBSA，10μLTween-20。6.底物溶液　　①磷酸鈉鹽緩沖液（0.1mol/LpH6.0）：稱(chēng)Na2HPO412H2O2.2g，NaH2PO42H2O6.84g，用蒸餾水溶解，定容至500mL。　?、赥MB貯液：稱(chēng)60mgTMB溶于10mL二甲基亞砜中，4℃避光保存。　?、鄣孜飸?yīng)用液：現(xiàn)用現(xiàn)配，磷酸鈉緩沖液10mL，TNB貯液10μL。30%H2O215μL，混勻?！　?.終止液：2mol/LH2SO4　　四、操作步驟　?、倏乖唬和每谷薎gG作為抗原，用包被液l：8000稀釋?zhuān)?00μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板　　中。4℃放置?！　、谙礈欤捍稳諆A去凹孔內(nèi)的液體，洗滌液洗3次?！　、鄯忾]：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h。　?、芟礈欤河孟礈煲合?次?！　、菁哟郎y(cè)樣品（一抗）：將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另塊板上用PBS連續(xù)稀釋?zhuān)ò凑?：2或1：10），100μL/孔加到已包被的板上，每個(gè)樣品平行做兩份，PBS或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，已知樣品作為陽(yáng)性對(duì)照。加蓋37℃恒溫箱溫育1~2h?！　、尴礈欤河孟礈煲合?次?！　、呒用笜?biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l：8000稀釋?zhuān)?00μL/孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h。　?、嘞礈欤河孟礈煲合?次，蒸餾水洗2次?！　、犸@色：ELISA試劑盒加新鮮配制的底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍(lán)色?！、饨K止反應(yīng)、比色：加50μL/孔終止液.顏色變黃;用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處各孔的吸光值，陽(yáng)性反應(yīng)的Zda稀釋度為待測(cè)樣品的效價(jià)。[詳細(xì)]

  2018-09-14 10:01

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• PerkinElmer腫瘤免疫微環(huán)境景觀分析方案

  PerkinElmer腫瘤免疫微環(huán)境景觀分析方案[詳細(xì)]

  2024-09-16 00:07

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• 滴定法測(cè)定油脂中酸價(jià)的不確定度評(píng)估

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  2024-09-28 14:01

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• 食用植物油中酸價(jià)測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)估

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  2024-09-16 03:21

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• 使用功能性O(shè)CT對(duì)腫瘤微血管進(jìn)行臨床前成像研究

  放射療法廣泛用于癌癥治療，目前技術(shù)朝著以更少的分割提供更高劑量發(fā)展，但這可能會(huì)引起細(xì)胞和微血管損傷。微血管系統(tǒng)可能是放療早期應(yīng)答的功能生物標(biāo)志物，然而很難直接且非侵入地測(cè)量微血管應(yīng)答情況，其時(shí)間進(jìn)程、劑量依賴(lài)性和在腫瘤控制中的總體重要性也尚不清楚。針對(duì)這種情況，加拿大研究人員Valentin Demidov等使用功能性O(shè)CT，結(jié)合人腫瘤異種移植物臨床前模型，對(duì)單次10、20和30 Gy放射劑量下腫瘤的微血管應(yīng)答情況進(jìn)行了體內(nèi)縱向定量成像研究，對(duì)放療后血管重塑進(jìn)行了詳細(xì)評(píng)估。定量評(píng)估了微血管對(duì)放療的即時(shí)（幾分鐘至幾十分鐘）和早期（幾天至幾周）應(yīng)答、腫瘤體積及熒光強(qiáng)度，與文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)的理論模型進(jìn)行了比較討論，發(fā)現(xiàn)這些放療應(yīng)答雖穩(wěn)定但很復(fù)雜，且隨時(shí)間呈劑量依賴(lài)性。該研究成果以“Preclinical longitudinal imaging of tumor microvascular radiobiologicalresponse with functional optical coherence tomography”為題發(fā)表于SCIENTIfIC REPORTS。[詳細(xì)]

  2022-05-24 14:59

  應(yīng)用文章

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• 離心機(jī)在免疫細(xì)胞上的應(yīng)用

  離心機(jī)在免疫細(xì)胞上的應(yīng)用[詳細(xì)]

  2014-04-28 00:00

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• Z8YJ圈(抗生素效價(jià))測(cè)量?jī)x用于抗生素微生物檢定

  Z8YJ圈(抗生素效價(jià))測(cè)量?jī)x用于抗生素微生物檢定[詳細(xì)]

  2024-09-23 19:43

  標(biāo)準(zhǔn)

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• 免疫細(xì)胞衰退—中年危機(jī)的健康警鐘

  埃澤思生物（ Applied Cell）總部位于上海，專(zhuān)注于細(xì)胞治療、再生醫(yī)學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域上游產(chǎn)品的研發(fā)與生產(chǎn)，公司產(chǎn)品在細(xì)胞與基因治療、細(xì)胞樣本存儲(chǔ)，藥物發(fā)現(xiàn)，科學(xué)研究等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。[詳細(xì)]

  2025-02-21 13:58

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• 免疫反應(yīng)研究適應(yīng)的和天生的免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)：細(xì)胞表面的

  免疫反應(yīng)研究適應(yīng)的和天生的免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)：細(xì)胞表面的[詳細(xì)]

  2005-04-05 00:00

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• NK細(xì)胞療法為卵巢癌治療提供新路徑

  埃澤思生物（ Applied Cell）總部位于上海，專(zhuān)注于細(xì)胞治療、再生醫(yī)學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域上游產(chǎn)品的研發(fā)與生產(chǎn)，公司產(chǎn)品在細(xì)胞與基因治療、細(xì)胞樣本存儲(chǔ)，藥物發(fā)現(xiàn)，科學(xué)研究等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。[詳細(xì)]

  2025-03-26 14:53

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• 使用誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞的毒性測(cè)定

  藥物導(dǎo)致的器官毒性是藥物進(jìn)入市場(chǎng)失敗的重要原因。所以，對(duì)藥物安全及藥物效果的高度預(yù)測(cè)是改善藥物開(kāi)發(fā)和減少候選藥物損失至關(guān)重要的一環(huán)。人類(lèi)誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSC)來(lái)源的肝細(xì)胞和神經(jīng)元所展現(xiàn)的典型特征與成熟細(xì)胞的代謝特點(diǎn)，是用于早期藥物開(kāi)發(fā)的高通量篩選的理想材料。[詳細(xì)]

  2021-02-19 13:57

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• FH1213-人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；SU-DHL-2

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  2024-05-30 09:33

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• FH0342-人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；SU-DHL-8

  FH0342-人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞；SU-DHL-8[詳細(xì)]

  2024-05-30 09:33

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