甲流疫苗中的鋁佐劑粒度控制

2月22日，北京市疾控中心發(fā)布消息，當(dāng)前北京市流行的流感病毒中，甲型流感病毒感染占絕對優(yōu)勢，其中甲型H1N1亞型占64%，甲型H3N2占35%，乙型流感占1%。據(jù)某搜索指數(shù)，近七日以來，“甲流”的搜索及報(bào)道量呈顯著上升趨勢，僅2月24日，就有69417的搜索量。^[1,2]甲流橫行，接種流感疫苗可預(yù)防甲型流感。

目前,甲流疫苗主要有三種類型：全病毒滅活疫苗［Influenza Vaccine（Whole Virion）,Inactivated；InfV-W］、裂解滅活疫苗［Influenza Vaccine（Split Virion），Inactivated；InfV-Sp］和亞單位滅活疫苗［Influenza Vaccine（Subunit），Inactivated；InfV-Su］等。根據(jù)疫苗生產(chǎn)是否加入佐劑，又分為有/無佐劑疫苗。流感疫苗研究中應(yīng)用到的佐劑主要有鋁佐劑（氧化鋁、氫氧化鋁、磷酸鋁）、MF59、LTK63、新型佐劑等，甲流疫苗常用的佐劑為鋁佐劑。^[3,4]

鋁佐劑粒徑檢測

鋁佐劑是第①個(gè)被批準(zhǔn)用于人體的疫苗佐劑，用于增加機(jī)體對于疫苗的反應(yīng)，特別是增強(qiáng)抗體的產(chǎn)生，改善由于年齡、疾病或其他原因?qū)е乱呙绶磻?yīng)能力降低的問題。在免疫過程 中，通過將抗原吸附到佐劑上，使得抗原被攜載進(jìn)入機(jī)體從而誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答。采用鋁佐劑類型，往往會用氫氧化鋁或者磷酸鋁。氫氧化鋁是一種表面只有羥基基團(tuán)的層狀晶體，以纖維粒子形式存在，這種粒子聚集后以松散的形式存在，大小約1-10μm，只有佐劑顆粒的外層可以和抗原結(jié)合。磷酸鋁佐劑是羥基磷酸鋁復(fù)合物，為無定形結(jié)構(gòu)，初始顆粒的是直徑為50nm的盤狀結(jié)構(gòu)，然后形成大約3μm左右的松散粒子。

影響鋁佐劑應(yīng)答反應(yīng)的因素包括抗原佐劑的吸附率、吸附強(qiáng)度、佐劑顆粒大小及均一性，其中佐劑顆粒大小可影響對抗原的提取、轉(zhuǎn)運(yùn)及與抗原相互作用。^[5]此外，還需關(guān)注過小的顆粒濃度，如果過小顆粒濃度過多，如低于100nm，幾十納米左右，那么注入體內(nèi)后可以穿過人體內(nèi)大部分細(xì)胞屏障，到達(dá)的人體部位更多更廣，由此造成的毒副作用會增加。在去年，輝瑞團(tuán)隊(duì)撰寫的關(guān)于《鋁佐劑疫苗的懸液性質(zhì)及表征》章節(jié)中，也提到了通過LumiSpoc關(guān)注小顆粒濃度。^[6]

疫苗在實(shí)際應(yīng)用過程中，常用冷藏方式保護(hù)疫苗免于高溫破壞，但也有使疫苗暴露于過低溫度的風(fēng)險(xiǎn)。含鋁佐劑的疫苗在經(jīng)冷凍后效價(jià)降低明顯。正常情況下，佐劑與抗原結(jié)合在一起。凍融后，佐劑與抗原之間的結(jié)合鍵會被破壞，導(dǎo)致佐劑與抗原脫離。分離的佐劑，會逐漸聚集，形成較大較重的顆粒，并慢慢沉淀于底部。失去佐劑的抗原，免疫原性大大降低、免疫效果大打折扣，疫苗也就失去了應(yīng)有的預(yù)防作用。同時(shí)，游離佐劑形成的大顆粒物質(zhì)，還會導(dǎo)致免疫副反應(yīng)的發(fā)生幾率升高[7]。因此，對于鋁佐劑大顆粒的監(jiān)控，大顆粒的控制也是穩(wěn)定工藝和避免不良反應(yīng)的監(jiān)控要點(diǎn)。

AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器系列

AccuSizer系列在檢測液體中顆粒數(shù)量的同時(shí)精確檢測顆粒的粒度及粒度分布，通過搭配不同傳感器、進(jìn)樣器，適配不同的樣本的測試需求，能快速而準(zhǔn)確地測量顆粒粒徑以及顆粒數(shù)量/濃度。

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檢測范圍為0.5μm-400μm（可將下限拓展至0.15μm）。

l  0.01μm的超高分辨率，AccuSizer系列具有1024個(gè)數(shù)據(jù)通道，能反映復(fù)雜樣品的細(xì)微差異，為研發(fā)及品控保駕護(hù)航。

l  靈敏度高達(dá)10PPT級別，即使只有微量的顆粒通過傳感器，也可以精準(zhǔn)檢測出來。

l  可出具法規(guī)報(bào)告

LumiSpoc單粒子顆粒計(jì)數(shù)器

LumiSpoc采用單粒子光散射技術(shù)（SPLS），通過在光學(xué)流通池中進(jìn)行流體動力聚焦，將單個(gè)粒子排列成一條直線。通過調(diào)整流動條件來調(diào)整樣品濃度，從而避免濃度峰值的影響。當(dāng)單個(gè)納米或者微米顆粒經(jīng)過特殊光束截面的激光束時(shí)，記錄其正向和側(cè)向散射的光強(qiáng)。根據(jù)米氏理論，將分類強(qiáng)度轉(zhuǎn)換為粒度分布密度。通過軟件分析顯示計(jì)數(shù)分布、顆粒濃度。在行業(yè)內(nèi)已有使用Lumispoc用于顆粒濃度的監(jiān)測成功案例

l  顆粒粒徑檢測范圍：50 nm ~ 8 μm（取決于樣品）

l  顆粒濃度檢測范圍：1 × 106 ml-1 ~ 1 × 109 ml-1

l  進(jìn)樣體積：250 μl

鋁佐劑安全性控制

鋁佐劑中的雜質(zhì)會影響鋁佐劑的安全性，鋁佐劑所用的生產(chǎn)材料一般為無機(jī)鹽，鋁佐劑中所含雜質(zhì)可能由原材料引入，也可能在生產(chǎn)過程中產(chǎn)生，Z終可被帶入至下游各階段產(chǎn)物中。因此應(yīng)考慮設(shè)置相關(guān)工藝步驟去除雜質(zhì)，并對關(guān)鍵生產(chǎn)參數(shù)、過程控制、反應(yīng)容器等多方面進(jìn)行充分驗(yàn)證。

Entegris-ANOW 濾芯

Entegris-Anow是一家高分子微孔膜過濾企業(yè)，專業(yè)從事MCE、Nylon、PES、PVDF、PTFE等（膜孔徑為0.03μm~10μm）微孔膜的研發(fā)及生產(chǎn)，具有二十多年服務(wù)與醫(yī)藥客戶經(jīng)驗(yàn)，并為生物制藥、醫(yī)療器械、食品飲料、實(shí)驗(yàn)室分析、微電子及工業(yè)等領(lǐng)域的客戶提供過濾、分離和凈化解決方案。

Entegris與Anow的結(jié)合，引入Entegris質(zhì)量管理體系，每一支濾芯都經(jīng)過嚴(yán)格檢查，此外，新建成的CTC驗(yàn)證中心，為客戶提供專業(yè)的驗(yàn)證服務(wù)。

參考資料：

[1]澎湃新聞

[2]張偉偉,李亮,朱鳳才,修仕信.甲型H_1N_1流行性感冒疫苗研究進(jìn)展及不良反應(yīng)監(jiān)測[J].

[3]中國疫苗和免疫,2010,16(03):275-278.DOI:10.19914/j.cjvi.2010.03.026.

[4]馬環(huán),汪運(yùn)洋,王晨,王珣,周第,陳興,潘海龍.納米氫氧化鋁佐劑的制備及其相關(guān)性質(zhì)分析[5]中國生物制品學(xué)雜志,2022,35(09):1107-1111.DOI:10.13200/j.cnki.cjb.003697.

[6]Langford, A., Bruchsaler, M., & Gupta, M. (2022). Suspension properties and characterization of aluminum-adjuvanted vaccines. Practical Aspects of Vaccine Development.

[7]陳婷婷, 陸偉根. 鋁佐劑特性及其研究進(jìn)展[J]. 世界臨床藥物, 2015(2):7.