色譜方法通常用于原料藥物藥物制劑和生物體液中化合物的定性和定量涉及的成分包括手性的或非手性的藥物過程雜質(zhì)殘留溶媒附加劑如防腐劑分解產(chǎn)物從容器和密閉包裝或制造過程中帶入的可提取和可過濾的雜質(zhì)植物藥中的農(nóng)藥和代謝物等 試驗方法的目的是得到可信賴的和準確的數(shù)據(jù)，無論是用于驗收出廠穩(wěn)定性或藥物動力學(xué)研究得到的數(shù)據(jù)用于藥品開發(fā)或批準后的定性和定量，試驗包括原料的驗收藥物和藥物制劑的出廠過程檢驗(In- process testing)的質(zhì)量保證和失效期的建立 方法的驗證是由藥品的開發(fā)者或使用者來檢驗其方法是否達到預(yù)期的可靠性準確度和精密度的過程得到的數(shù)據(jù)成為方法的驗證資料的一部分交給CDER. 方法的驗證對于完成機構(gòu)滿足檔案要求不是一次性的，開發(fā)者和使用者都應(yīng)驗證其方法的耐用度或耐久性（ruggedness or robustness.），其他的分析者用其它相當?shù)膬x器，在其它的日期或地點，在藥品生產(chǎn)期限(有效期)全過程，方法都應(yīng)能夠重現(xiàn)如果產(chǎn)生數(shù)據(jù)的方法是可靠的，那么所得到的驗收出廠穩(wěn)定性或藥物動力學(xué)的數(shù)據(jù)就是可信賴的驗證的過程和方法的設(shè)計應(yīng)在開發(fā)過程中重要的數(shù)據(jù)產(chǎn)生之前，如果方法改變了，還應(yīng)該再驗證 . 色譜類型 色譜是一種技術(shù)，通過該技術(shù)，樣品中的組分載入液相或氣相中，通過在固定相上由吸附解吸附來完成 A. GX液相色譜 (HPLC) HPLC分離是基于在樣品在流動相液體和固定相之間的不同分配一般地說HPLC大體分為以下幾種(未考慮其重要性順序) 1. 手性液相色譜 2. 離子交換色譜 3. 離子對/親和色譜 4. 正相色譜 5. 反相色譜 6. 分子排阻色譜 1. 手性液相色譜 分離光學(xué)異構(gòu)體可在手性固定相上，用衍生化試劑或在非手性固定相上用流動相添加劑形成非對對映體來實現(xiàn)用作雜質(zhì)試驗方法時，如果光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)在光學(xué)異構(gòu)體藥物之前洗脫，要增加靈敏度 2. 離子交換色譜 分離基于荷電功能團，樣品負離子(X - )為陰離子，樣品正離子((X + )為陽離子，一般用pH程序洗脫 3. 離子對/親和色譜 分離基于與目標樣品的專一的化學(xué)相互作用更普遍的反相型用緩沖液和加入的對離子(與被分離的樣品荷相反電荷)分離分離受pH離子強度溫度濃度和共存的有機溶劑類型的影響親和色譜，一般用于大分子，使用配合體（共價結(jié)合在固體基質(zhì)上的生物活性分子)，與其同類的抗原(分析介質(zhì))反應(yīng)，生成可逆轉(zhuǎn)的復(fù)合物，通過改變緩沖條件洗脫 4. 正相色譜 正相色譜為用有機溶劑為流動相和極性的固定相此時較小極性的組分比較大極性組分更快地洗脫 5. 反相色譜 報給CDER的Z通常的實驗方法是反相HPLC方法， Z通常用紫外檢測器 反相色譜，一種鍵合相的色譜技術(shù)，用水作基本溶劑，選擇性也受溶劑強度柱溫和pH的影響，一般來說較大極性比較小極性組分洗脫更快 紫外檢測器可以用于所有色譜，這類檢測器要注意的是燈老化后的靈敏度降低，其靈敏度因(儀器)的設(shè)計和/或者制造廠家的不同有小的變異需要指出，用紫外檢檢測器和反相HPLC組合得到的色譜圖不一定能真實的反映事實，原因是： •極性比目標化合物大得多的化合物可能被掩蓋(在溶劑前沿或死體積時同時洗脫) •極性比目標化合物小得多的化合物洗脫出來晚，甚至保留在柱上 •紫外吸收系數(shù)較低和Zda吸收不同的化合物在檢測相對較低濃度的目標分析物時不能被檢出，因為通常只有一個檢測波長 6. 排阻色譜 也叫凝膠滲漉(permeation)或濾過，分離基于化合物分子大小或水動力學(xué)(hydrodynamic)容積比多孔柱填料孔徑大得多的分子Zxian洗脫，小分子進入孔隙洗脫晚，其余的洗脫速率取決于其分子的相對大小