小鼠抗核抗體（ANA)酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書 本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿,細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠抗核抗體（ANA)含量 實(shí)驗(yàn)原理： 本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠抗核抗體（ANA)水平用純化的小鼠ANA抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入抗核抗體（ANA)，再與HRP標(biāo)記的ANA抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色顏色的深淺和樣品中的抗核抗體（ANA)呈正相關(guān)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠抗核抗體（ANA)濃度 試劑盒組成： 試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存 說明書 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1個(gè) 1個(gè) 酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8保存 標(biāo)準(zhǔn)品：27ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8保存 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8保存 酶標(biāo)試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8保存 濃縮洗滌液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8保存 樣本處理及要求： 1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心 2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心胸腹水腦脊液參照實(shí)行 4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心 5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量加入一定量的PBS，PH7.4用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆脴?biāo)本融化后仍然保持2-8的溫度加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用 6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性