小鼠17-羥皮質(zhì)類固醇（17-OHCS）酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書 本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中17-羥皮質(zhì)類固醇（17-OHCS）的含量 實驗原理： 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠17-羥皮質(zhì)類固醇（17-OHCS）水平用純化的小鼠17-羥皮質(zhì)類固醇（17-OHCS）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入17-羥皮質(zhì)類固醇（17-OHCS），再與HRP標記的17-OHCS抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色顏色的深淺和樣品中的17-羥皮質(zhì)類固醇（17-OHCS）呈正相關(guān)用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠17-羥皮質(zhì)類固醇（17-OHCS）濃度 操作步驟 1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在**第二孔中分別加標準品100l，然后在**第二孔中加標準品稀釋液50l，混勻；然后從**孔第二孔中各取100l分別加到第三孔和第四孔，再在第三第四孔分別加標準品稀釋液50l，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50l棄掉，再各取50l分別加到第五第六孔中，再在第五第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五第六孔中各取50l分別加到第七第八孔中，再在第七第八孔中分別加標準品稀釋液50l，混勻后從第七第八孔中分別取50l加到第九第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50l，混勻后從第九第十孔中各取50l棄掉（稀釋后各孔加樣量都為50l，濃度分別為24g/L，16g/L ，8g/L，4g/L，2g/L） 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）待測樣品孔在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品Z終稀釋度為5倍）加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻 3. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘 4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干 6. 加酶：每孔加入酶標試劑50l，空白孔除外 7. 溫育：操作同3 8. 洗滌：操作同5 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘. 10. 終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值） 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行