樣品準備/提取

2.1 稱量：

牛奶：稱取2.0 g樣品，極ng確到0.01 g，置于50 mL塑料離心管中；

奶粉：稱取0.5 g，極ng確到0.01 g，置于50 mL塑料離心管中，加入6 mL磷酸鹽緩沖液混勻。

2.2 提取

（1）向離心管中加入10 mL乙腈，于渦旋振蕩上渦旋混和1 min，4000 rpm離心5 min，上清液過濾到圓底燒瓶中；

（2）在殘渣中加入5 mL磷酸鹽緩沖液，10 mL乙腈，重復步驟（1），合并上清液；

（3）50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至乙腈全部蒸出；

（4）向燒瓶中加入5 mL磷酸鹽緩沖液，混勻，待凈化。

*磷酸鹽緩沖液：pH3.0的0.05 mol/LNa2HPO4和KH2PO4，

SPE柱凈化

ProElut PLS 60 mg/3 mL（Cat.#68003）

(1)活 化： 依次加入3 mL甲醇、5 mL水、5 mL磷酸鹽緩沖液，流出液棄去。

(2)上 樣： 將上樣液加入柱中，流出液棄去。

(3)淋 洗： 依次用5 mL 磷酸鹽緩沖液、5 mL水淋洗、25%甲醇水淋洗，淋洗液棄去。

(4)洗 脫： 6 mL5%氨水甲醇洗脫，收集流出液。

(5)重新溶解： 在40℃下用減壓蒸餾將收集液蒸至近干，然后用流動相定容至1 mL后，過微孔濾膜供HPLC分析。

分析條件

色譜柱： Diamonsil C18（2），250 mm×4.6 mm，5μm（Cat.#99603）

流 速： 1.0 mL/min

檢測器：* UV 280 nm

柱 溫： 35℃

進樣量： 20 μL

流動相： A．0.2%磷酸水溶液，B．甲醇 時間/min 0 25 40 42 50 A 78 67 35 78 78 B 22 33 65 22 22

適用于牛奶和奶制品中馬波沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、雙氟沙星、司帕沙星、帕珠沙星、環(huán)丙沙星、加替沙星、沙拉沙星、惡喹酸、萘啶酸、氟甲喹的檢測。

1 馬波沙星、2 恩諾沙星、3 氧氟沙星、4 諾氟沙星、5 雙氟沙星、6 司帕沙星、7 帕珠沙星、8 環(huán)丙沙星、9 加替沙星、10 沙拉沙星、11 惡喹酸、12 萘啶酸、13 氟甲喹