【概述】

夏天無為罌粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens（Thunb.）Pers的干燥塊莖。春季或初夏出苗后采挖，除去莖、葉及須莖，洗凈，干燥。夏天無粉味苦、微辛，性溫。歸肝經(jīng)。主要功效為Activating blood to relieve pain，舒經(jīng)活絡(luò)，祛風(fēng)除濕。用于中風(fēng)偏癱，頭痛，跌撲損傷，風(fēng)濕痹痛，腰腿疼痛。

1、          方法原理

參照《中華人民共和國藥典 2020版》中夏天無，Protoopioid和鹽酸巴馬汀為目標物，其中，Protoopioid的檢測波長為289nm，鹽酸巴馬汀的檢測波長為345nm。以Protoopioid和鹽酸巴馬汀標準溶液定性，處理后的樣品經(jīng)色譜柱分離，峰面積外標法定量。

2、          主要儀器和試劑

1. HPLC液相色譜儀：LC220，具變波長功能；

2. 萬分之一天平；

3. 蒸發(fā)回流裝置及實驗室常用玻璃儀器；

4. Protoopioid和鹽酸巴馬汀標準品。

3、         實驗方法

3. 1 色譜條件

流動相：乙腈:三乙胺醋酸溶液（4mL三乙胺+15mL醋酸→500mL）=25:75；

色譜柱：C18反相柱，250mm*4.6mm*5μm；

柱溫：30℃；

進樣量：10μL；

波長：0~10min：289nm，10~15min：345nm，15~16min：289nm。

3.2 對照品溶液制備

準確稱取Protoopioid對照品10mg于50mL容量瓶中，加1%鹽酸溶液5mL溶解，再加甲醇至刻度，搖勻。另準確稱取鹽酸巴馬汀對照品10mg于100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。準確量取上述兩種溶液各5mL于同一25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得40ppmProtoopioid和20ppm鹽酸巴馬汀標準溶液。

3.3 供試品溶液制備

準確稱取夏天無粉0.5g于具塞錐形瓶中，準確加入甲醇50mL，稱定重量。加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

4、          實驗結(jié)果

4.1 儀器穩(wěn)定性

                                                                          圖1 標樣7針重復(fù)性測試

Protoopioid7針重復(fù)性：RSD=0.86%

鹽酸巴馬汀7針重復(fù)性：RSD=0.47%

4.2 標準溶液對照譜圖

                                                                                       圖2 混標譜圖

4.3 樣品譜圖

                                                                                    圖3 樣品譜圖

                                                                                圖4 雙樣雙針

ProtoopioidRD1%=0.11%，RD2%=0.05%

鹽酸巴馬汀RD1%=0.28%，RD2%=0.37%

4.4 標準曲線

                                                                             圖5 Protoopioid標準曲線

                                                                             圖6 鹽酸巴馬汀標準曲線

4.5 計算

a) 雙樣雙針法（若與藥典算法有出入請以藥典為準）：

b)  標準曲線法