關于乳鐵蛋白及檢測

乳鐵蛋白是人體重要的免疫蛋白之一，具有多樣化的體內(nèi)抑菌、免疫調(diào)節(jié)和各種生理功能，具有廣譜抗菌，抗病毒感染作用，能調(diào)節(jié)體內(nèi)鐵的平衡；調(diào)節(jié)骨細胞的生成，促進細胞的生長；調(diào)節(jié)機體免疫功能，增強機體抗病能力，抑制人體腫瘤細胞的作用;能同多種抗生素及抗真菌制劑協(xié)同作用，更有效地治療疾病。

乳鐵蛋白典型的應用方式是作為營養(yǎng)強化劑添加到嬰幼兒配方奶粉、酸奶等乳制品中，以強化提升免疫力和調(diào)整腸道菌群穩(wěn)態(tài)的功效，同時有助于嬰幼兒神經(jīng)發(fā)育與預防感染，所以乳品中乳鐵蛋白含量的檢測也至關重要。

關于乳品中乳鐵蛋白的檢測，國家于2024年2月發(fā)布了GB 5009.299-2024食品中乳鐵蛋白的測定的標準方法，該方法為高效液相色譜法，用于測定巴氏殺菌乳、調(diào)制乳、含乳飲料、調(diào)制乳粉以及乳基嬰幼兒配方食品中牛乳鐵蛋白含量的測定。樣品經(jīng)磷酸緩沖鹽溶液提取，肝素親和柱凈化，液相色譜-紫外檢測器檢測。

美正Robussil C4色譜柱，

助力乳鐵蛋白的高效液相檢測

乳鐵蛋白的檢測需要用到C4色譜柱，美正生物始終致力于為食品檢測實驗室的老師們提供完整的解決方案，我們于2024年5月上線了Robussil C4色譜柱，為乳鐵蛋白的高效液相檢測又提供了一大助力。

經(jīng)過實驗室驗證，使用Robussil C4色譜柱檢測乳鐵蛋白，保留時間穩(wěn)定，峰型良好，分離效果良好，配合美正肝素親和柱，能夠滿足GB 5009.299-2024對乳品中乳鐵蛋白的檢測。以下為實驗部分。

1樣品制備

樣品提取

稱取奶粉樣品1 ~ 5 g（具體稱樣量根據(jù)樣品中乳鐵蛋白含量而定，使過柱的乳鐵蛋白含量不超過柱容量），加入適量溫熱的（不超過50℃）磷酸鹽緩沖液2，攪拌使樣品溶解，再使樣品冷卻至室溫，分次將樣品轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，并用磷酸鹽緩沖液2定容至刻度，充分混勻后轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，取出40 mL樣品于4℃條件下10000 r/min離心8 min，上清液待凈化。

樣品凈化

將肝素親和柱在室溫下回溫至室溫，取下下端堵頭，將保護液放出，再用5 mL磷酸鹽緩沖液2活化親和柱，然后，量取待凈化液10 mL上于親和柱上，控制流速在1 ~ 3 mL/min，棄去流出液，用10 mL磷酸鹽緩沖液2淋洗小柱，棄去流出液，將殘留淋洗液用洗耳球輕輕擠干，再用5 mL磷酸鹽緩沖液1洗脫，收集洗脫液并用磷酸鹽緩沖液1定容至5 mL，搖勻，用0.45 μm水相濾膜過濾，待測。

NO.2 色譜條件

色譜柱：Robussil C4，5 μm，4.6 × 250 mm ；

流動相：A 相-0.1%三氟乙酸水溶液（V/V），B相- 乙腈；

柱  溫：30℃；

流  速：1 mL/min；

檢測波長：280 nm；

進樣量：50 μL；

梯度洗脫條件

NO.3實驗結果

奶粉基質(zhì)加標回收實驗結果 

（添加水平400 mg/kg，n = 3）

NO.4實驗譜圖

乳鐵蛋白標準工作溶液色譜圖

奶粉樣品檢測色譜圖

乳鐵蛋白標準曲線

NO.5結論

本實驗參考GB 5009.299-2024標準，使用肝素親和柱結合HPLC-UV的方法對添加水平為400 mg/kg的奶粉樣品進行了檢測。結果表明，使用肝素親和柱對奶粉基質(zhì)進行凈化，乳鐵蛋白回收率滿足要求且變異系數(shù)小于20%。使用Robussil C4色譜柱對乳鐵蛋白進行檢測，峰型良好，保留時間穩(wěn)定。說明肝素親和柱和Robussil C4色譜柱的性能滿足于GB 5009.299-2024標準方法，能夠滿足奶粉中乳鐵蛋白的檢測需求。