引言：

SOD是含金屬輔基的酶。高等植物含有兩種類型的SOD:Mn-SOD和Cu.Zn-SOD，它們都催化下列反應:由于超氧自由基(02)為不穩(wěn)定自由基，壽命極短，測定SOD活性一般為間接方法。并利用各種呈色反應來測定SOD的活力。核黃素在有氧條件下能產(chǎn)生超氧自由基負離子02-..-，當加入NBT后，在光照條件下，與超氧自由基反應生成單甲躦(黃色)，繼而還原生成二甲躦，它是一種藍色物質(zhì)，在560nm波長下有Z大吸收。當加入SOD時，可以使超氧自由基與H結(jié)合生成H2O2和02，從而抑制了NBT光還原的進行，使藍色二甲攢生成速度減慢。通過在反應液中加入不同量的SOD酶液，光照--定時間后測定560nm波長下各液光密度值，抑制NBT光還原相對百分率與酶活性在一定范圍內(nèi)呈正比。反應液藍色愈深，說明酶活性愈低。

儀器及試劑

美析UL-1000超微量紫外可見分光光度計

離心機

0.05mol/L 磷酸緩沖液(PBS，pH7.8):

A母液: 0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液:取Na2HPO4 12H20(分子量358.14)71.7g; B 母液: 0.2mol/L 磷酸二氫鈉溶液:取NaH2PO4 12H2O (分子量156.01) 31.2g。分 別用蒸餾水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS ( pH7.8)的配制:分別取A母液(Na2HPO4) 228.75ml,

B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸餾水定容至1000ml。

14.5mM甲硫氨酸溶液:稱取1.0818g Met用磷酸緩沖液(pH7.8)定容至500ml。

3mM EDTA-Na2溶液:稱取0.1117g EDTA-Na2用磷酸緩沖液定容至100ml。

60μM核黃素溶液:稱取0.0023g核黃素用磷酸緩沖液定容至100ml，避光保存。

2.25mM氮藍四唑(NBT)溶液:稱取0.092g NBT用PBS定容至50ml,避光保存。