酶聯(lián)免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留利用萃取液通過均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進行免疫測定先將三聚氰胺酶標記物，樣品萃取物及標準加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應(yīng)在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標記物再用去離子水清洗結(jié)束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結(jié)合的酶標記物將無色的底物轉(zhuǎn)化為藍色的物質(zhì)孵育30分鐘后停止此反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深淺進行數(shù)據(jù)讀取依據(jù)標準的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值 需要準備的材料： 1蒸餾水或去離子水 2可吸取50ul和100ul的移液器及吸頭 34000轉(zhuǎn)離心機 4吸水紙或相當(dāng)?shù)奈牧?5450nm的酶標儀 6計時器 720mM PBS：需自行配制 8清洗液：需自行配制 試劑配制： 120mM PBS： 0.62g NaH2PO4•2H2O+5.73g Na2HPO4•12H2O+9g NaCl，蒸餾水定容至1000ml 2清 洗 液： 0.62g NaH2PO4•2H2O+5.73g Na2HPO4•12H2O+9g NaCl，蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20 樣品的前處理： 肉類(稀釋倍數(shù)：5) 1 稱1g肉樣，加入5ml的10%甲醇/20Mmpbs，震蕩2min； 2 4000轉(zhuǎn)離心5min； 3 取2ml 上清液加入2ml異辛烷：氯仿(2：3)，混勻； v4 4000轉(zhuǎn)離心5min，取上層150ul測定[/b] 測定過程： 1將所有試劑及樣品回升至室溫20-28，但不要放置超過24小時； 2從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條固定在微孔板架上，未使用的孔條與干燥劑一同放入密封袋中保存； 3吸取150ul標準品樣品到對應(yīng)微孔中，必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染加入 50ul三聚氰胺酶標記物到每個小孔中； 4輕輕搖板60秒，20-28攝氏度下孵育30分鐘； 5將微孔中的溶液倒入水槽中，用清洗液完全充滿微孔，震蕩后倒掉，重復(fù)三次，總共四次洗板； 6Z后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻轉(zhuǎn)微孔板在吸水紙上拍干； 7每個微孔中加入100ul底物溶液； 820-28攝氏度下，孵育30分鐘； 9每個微孔中加入100ul停止液； 10450nm下讀板 Mediwax-12固相萃取裝置_固相萃取儀