引言

冠狀支架是一些金屬支架，可以在已經(jīng)閉合或是看起來(lái)很可能要閉合的動(dòng)脈中與一個(gè)氣囊導(dǎo)管一道擴(kuò)展。冠狀支架通過支撐開啟動(dòng)脈恢復(fù)足夠的血液流動(dòng)到心肌。

冠狀支架的發(fā)明人是Charles Dotter，他在1969年研制出他的DY個(gè)支架。Charles Dotter 繼續(xù)改進(jìn)和發(fā)展他的設(shè)計(jì)并在1983年與Andrew Craig一道發(fā)明了一種可以擴(kuò)展的支架，這是用一種鎳鈦合金制造的，目前這種材料經(jīng)常用來(lái)制作支架。

隨著支架的使用越來(lái)越成為平常的事情，對(duì)于人體和支架的交互作用有較好的理解始終是一個(gè)重要的臨床議題。對(duì)于不同的支架設(shè)計(jì)、材料、表面涂層、以及附屬的藥物處理的研究要求對(duì)于裝有支架的血管進(jìn)行詳盡的組織學(xué)和免疫組織化學(xué)分析，特別是在支架原位的細(xì)胞組織與金屬的界面處。

正確的制備技術(shù)將會(huì)增強(qiáng)對(duì)細(xì)胞組織對(duì)臨床安裝支架（特別是在細(xì)胞組織與支架的界面處）的反應(yīng)。此外，它還可以對(duì)擴(kuò)展特性進(jìn)行周密的評(píng)估。這種觀察甚至能導(dǎo)致研制出經(jīng)過改進(jìn)的支架設(shè)計(jì)。

試樣制備步驟

1. 切除安裝有支架的動(dòng)脈，用鹽水沖洗并浸入鹽水中固定兩小時(shí)。

2. 取薄切片之前先將安裝有支架的動(dòng)脈進(jìn)行鑲嵌。選擇一種收縮率Z小、并且在取薄切片的過程中不會(huì)使鑲嵌材料發(fā)生軟化。一種低粘度環(huán)氧樹脂，例如EpoThin^?，是一個(gè)非常好的選擇。使用時(shí)按照產(chǎn)品的說(shuō)明量出樹脂和硬化劑并將其均勻混合，操作時(shí)的動(dòng)作應(yīng)當(dāng)和緩以避免產(chǎn)生過多的氣泡。使用前，將混合物靜置數(shù)分鐘，以便使殘留的空氣上升至頂部而逸出。將試樣放入模具內(nèi)并將試樣與環(huán)氧樹脂進(jìn)行真空浸透。ZH，澆入足夠數(shù)量的環(huán)氧樹脂，使其完全覆蓋住試樣。

3. 在用精密切割機(jī)進(jìn)行切割前，先用600#（P1200）和120#（P2500）CarbiMet? SiC砂紙，在MetaServ? 2000型磨光/拋光機(jī)或類似的設(shè)備上將鑲嵌好的試樣端面磨光。

4. 用接觸粘合劑將磨光表面粘接在承物玻璃片上。用 perspex (一種介電有機(jī)玻璃) 做的承物片對(duì)鑲嵌截面可提供比普通承物玻璃片更大的粘合力。不過，用600#（P1200）CarbiMet^? SiC砂紙對(duì)普通承物玻璃片進(jìn)行預(yù)磨光也能改善其粘合性能。

5. 選擇一種能使切割損耗 (即由于切割片本身的厚度在切割過程中對(duì)試樣材料產(chǎn)生的磨耗) Z小的切割片進(jìn)行切割。備注：使用薄切割片時(shí)選用的法蘭盤（切割片的支撐）應(yīng)當(dāng)能提供ZD的支撐，以避免切割時(shí)發(fā)生彎曲或扭動(dòng)。粘接了立方氮化硼的 IsoCut^? 型薄切割片能夠在每15 mm 的支架上能再現(xiàn)地切割出28至30個(gè)截面。

安裝了支架的動(dòng)脈薄截面顯微組織，示出了細(xì)胞組織與支架的界面

6. 將經(jīng)過鑲嵌的試樣裝在 IsoMet^? 型精密切割機(jī)的夾鉗上。將顯微測(cè)微計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)，從試樣承物玻璃片一端截取50 至100 μm 厚的截面。

7. 重復(fù)步驟3和4，制備下一個(gè)截面的表面。重復(fù)這一過程并將陸續(xù)得到的截面分別粘接在承物玻璃片上。

8. 用一系列的CarbiMet^? SiC砂紙將每個(gè)截面磨光至厚度為10–20 μm。固定在砂紙紙基上的SiC磨料顆粒不至于嵌入試樣中的細(xì)胞組織部分。磨光先從320# (P400) 砂紙開始，接著使用360# (P500)、400# (P800)、600# (P1200)、1200# (P2500) 砂紙。磨光時(shí)要仔細(xì)，避免使材料去除過快和不均勻。在轉(zhuǎn)入下一道砂紙以前要檢查是否已經(jīng)獲得均勻的劃痕。

9. 用3 μm 的 UltraPrep? A 型金剛石研磨薄膜進(jìn)行拋光，然后就可以進(jìn)行顯微觀察。

自動(dòng)化制備設(shè)備/特殊夾具

如果打算用手工方法對(duì)薄截面試樣進(jìn)行磨光和拋光，操作者應(yīng)具有相當(dāng)豐富的經(jīng)驗(yàn)，所需的時(shí)間也較長(zhǎng)。用手工方法磨薄截面試樣也容易將試樣磨偏，使截面一側(cè)的厚度小于另一側(cè)。

表面和厚度不均勻的截面試樣不能為組織化學(xué)分析提供ZJ的條件。為了制備用于組織學(xué)和免疫組織化學(xué)染色的試樣，試樣應(yīng)當(dāng)磨光至5 μm 并且厚度均勻。

為了將以上提到的問題減至Z小，當(dāng)試樣需要用手工方法制備時(shí)，可以使用具有固定的止動(dòng)裝置夾持器。例如，組織學(xué)精密磨光夾具 (產(chǎn)品編號(hào)60-8087) 具有用碳化物做的止動(dòng)裝置，可以避免使試樣磨光過度并使試樣獲得均勻的所需厚度。夾具適用的承物玻璃片尺寸為27 x 46mm。

便攜式BioThin?型薄截面切割裝置(產(chǎn)品編號(hào)38- 2100)用來(lái)切割厚度為5 μm的截面已經(jīng)獲得了巨大的成功。這個(gè)全封閉系統(tǒng)使用滾珠軸承來(lái)控制所施加力的大小和承物片的定位。對(duì)于染色前的ZZ減薄，建議使用磨料尺寸為 3 μm 的 UltraPrep? A 型金剛石研磨薄膜。

大多數(shù)半自動(dòng)磨光/拋光機(jī)再加上巖相學(xué)和組織學(xué)用的薄截面承物片夾持器 (產(chǎn)品編號(hào)69 -1584) 并使用單獨(dú)加載方式，就可以使磨光過程自動(dòng)化。使用雙面膠帶將包含薄截面試樣的承物片粘接在承物片夾持器上。然后將一個(gè)個(gè)承物片夾持器放入單獨(dú)加載承物片夾持器中。對(duì)每塊試樣施加的載荷為 3 至 5 磅/平方英寸，取決于所需的材料去除速率。至少每隔2分鐘對(duì)試樣的制備效果進(jìn)行評(píng)估直到ZJ制備步驟確立為止。

參考文獻(xiàn)

M Bellis, “Coronary Stents” Inventors – Cardiac Pacemaker/Electrocardiology.http://inventors. about.com/library/inventors/blcardiac.htm (last viewed Oct 15, 2004).

M. Malik, J Gunn, CM Holt, L Shepherd, SE Francis, CMH Newman, DC Crossman, DC Cumberland, “Intravascular stents: a new technique for tissue processing for histology, immunohistochemistry, and transmission electron microscopy” Heart 1998; 80:509-516.

設(shè)備*

Cast N’ Vac 型真空澆注系統(tǒng)

IsoMet^? 系列精密切割機(jī)

MetaServ^? 2000型磨光/拋光機(jī)

或其他型號(hào)磨光/拋光機(jī)

消耗器材*

IsoCut^? CBN薄切割片

EpoThin^? 低粘度環(huán)氧樹脂

CarbiMet^? 砂紙

UltraPrep^TM 金剛石研磨薄膜