獲得乙腦病毒(JEV)鼠源單鏈抗體基因(ScFv)并使其在E.coli中表達(dá)方法利用噬菌體表面呈現(xiàn)技術(shù),從抗乙腦病毒雜交瘤細(xì)胞2H4中構(gòu)建噬菌體抗體庫,采用雙抗體夾心模式對抗體庫進(jìn)行富集及檢測并將所獲得的陽性克隆基因插入GST融合表達(dá)載體中,構(gòu)建融合表達(dá)克隆,使其在E.coli中獲得穩(wěn)定表達(dá)產(chǎn)物結(jié)果所構(gòu)建的噬菌體抗體庫經(jīng)3輪的吸附洗脫及再感染的富集過程后,共檢測到7株穩(wěn)定的具有乙腦抗原結(jié)合活性的陽性克隆,對其中的mu2H4-3和mu2H4-36進(jìn)行了序列測定經(jīng)分析,2個克隆的基因序列一致,其重鏈及輕鏈分別屬于Kabat鼠抗體基因家族中第及第亞群構(gòu)建為融合表達(dá)載體pG51-mu2H4后,此單鏈抗體mu2H4在E.coli BL21中獲得表達(dá),產(chǎn)量約為菌體蛋白的10%結(jié)論從抗乙腦病毒雜交瘤細(xì)胞中克隆并表達(dá)了特異單鏈抗體片段mu2H4,為下一步的人源化改造提供了資料
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