將0.5 mL (20 種氨基酸+NH3)混合使用液(胱氨酸濃度為0.25 mmol/L，其他化合物濃度為0.5 mmol/L)加入5 mL 玻璃具塞刻度試管中，然后加入0.5 mL 0.1 mol/L Na2B4O7 水溶液和1% DNFB 乙腈溶液，具塞搖勻，然后于60 ℃下避光反應1 h。反應完畢將試管置于冷水中冷卻，然后用0.02 mol/L Na2HPO4 + 0.02 mol/L NaH2PO4 水溶液定容至5 mL，混勻后待檢測。

分析條件
儀器: 二元高壓HPLC系統(tǒng)
色譜柱: Diamonsil AAA 250 × 4.6 mm，5 μm（Cat.#：99751）
流動相A: 0.02 mol/L Na2HPO4 + 0.02 mol/L NaH2PO4 水溶液
流動相B: 甲醇 : 乙腈=10 : 90 (V : V)
流速: 1.0 mL/min
檢測波長: UV 360 nm
柱溫: 45 ℃
進樣體積: 10 μL

梯度程序

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該方法適用于氨基酸注射液、動植物性食品和飼料中Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(絲氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(組氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(蘇氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(纈氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、Ile(異亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(賴氨酸)等天然氨基酸的檢測。

19 種天然氨基酸、2-氨基丁酸以及NH3(氨)-DNFB 衍生物等液相色譜圖

1 Asp(天冬氨酸) 2 Glu(谷氨酸) 3 Ser(絲氨酸) 4 2,4-二硝基苯酚 ?5 Arg(精氨酸)? 6 Gly(甘氨酸) 7 Thr(蘇氨酸) 8 Pro(脯氨酸) ?9 Ala(丙氨酸) 10 2-氨基丁酸 11 Val(纈氨酸) 12 Met(甲硫氨酸) ?13 Cys-Cys(胱氨酸) 14 NH3 15 Ile(異亮氨酸) 16 Leu(亮氨酸) ?17 Trp(色氨酸) 18 His(組氨酸) 19 Phe(苯丙氨酸) 20 DNFB ? 21 Cys(半胱氨酸) 22 Lys(賴氨酸) 23 Tyr(酪氨酸)