基因ZL可以在DNA和mRNA水平上對致病基因進行修正從而達到治LX果，相對于傳統(tǒng)藥物，對于一些成藥性較差的靶點具有獨特優(yōu)勢，因此基因ZL對于特定基因引起的疾病有極大的應(yīng)用潛能，其中腫瘤和罕見病是基因ZLZ主要的應(yīng)用領(lǐng)域。在ZG，基因ZL藥物Gendicine于2004年獲得國家食品藥品監(jiān)督管理局的批準(zhǔn)上市，成為世界上shou個獲批上市的商業(yè)基因ZL產(chǎn)品。2005年，溶瘤病毒產(chǎn)品Oncorine也在ZG獲批上市，目前，已有300余個基因ZL產(chǎn)品已經(jīng)上市或正在FDA和EMA的監(jiān)管下進行開發(fā)，這些基因ZL產(chǎn)品都涉及持續(xù)的編碼蛋白質(zhì)DNA轉(zhuǎn)移，并利用了多種體內(nèi)和體外技術(shù)。

使用毛細(xì)管電泳SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統(tǒng)，可廣泛應(yīng)用于基因ZL中的質(zhì)粒DNA純度分析、腺相關(guān)病毒（AAV）衣殼蛋白的純度分析、腺相關(guān)病毒的等電點分析、宿主細(xì)胞殘留DNA的片段分布分析等許多方向，并具備以下優(yōu)勢特點：

· 分離度好：可基線分離超螺旋、開環(huán)及線性的質(zhì)粒，可基線分離AAV的VP1、VP2、VP3蛋白，易于產(chǎn)品的定量及質(zhì)控；

· 重復(fù)性好：超螺旋質(zhì)粒：遷移時間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜0.5%，校準(zhǔn)峰面積RSD＜2%；AAV衣殼蛋白：遷移時間RSD＜0.5%，校準(zhǔn)峰面積RSD＜5%；AAV等電點：pI的RSD＜0.2%， 峰面積RSD＜2%。

· 靈敏度高：使用激光誘導(dǎo)熒光的檢測模式等，可提供超高的檢測靈敏度；

· 操作簡單：具有商品化的試劑盒，自動化程度高；

· 適用范圍廣、方法靈活度高：適用于不同大小范圍的質(zhì)粒的分析；針對不同血清型AAV，可優(yōu)化方法得到更優(yōu)異的純度和等電點分析結(jié)果；

· 符合法規(guī)：儀器具有操作（OQ）認(rèn)證，操作軟件能夠進行權(quán)限設(shè)置和審計

圖1. SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統(tǒng)與試劑盒

01-毛細(xì)管凝膠電泳法（CGE-LIF）對質(zhì)粒DNA的純度分析

質(zhì)粒DNA作為基因制劑的傳遞載體，被廣泛應(yīng)用于基因ZL、細(xì)胞ZL、疫苗等生物制品領(lǐng)域。質(zhì)粒DNA主要有三種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，超螺旋、開環(huán)和線性形式。超螺旋質(zhì)粒在細(xì)胞轉(zhuǎn)染及基因表達方面優(yōu)于其他形式，所以，高質(zhì)量、高純度的超螺旋質(zhì)粒DNA是確保基因制劑安全性和有效性的前提條件。歐洲藥物評審組織（EMEA）在關(guān)于“慢病毒載體的生產(chǎn)與開發(fā)”指導(dǎo)方針中指出，有必要在慢病毒載體的生產(chǎn)中使用高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）用于基因制劑質(zhì)粒DNA指導(dǎo)意見的要求，超螺旋質(zhì)粒百分比需大于80%。我國《生物技術(shù)藥物研究開發(fā)和質(zhì)量控制》一書中指出，對于質(zhì)粒類生物制品超螺旋比例一般要大于90%。在質(zhì)粒的研發(fā)和生產(chǎn)過程中，質(zhì)粒的純化工藝研究，制劑配方工藝研究，大規(guī)模生產(chǎn)的批次一致性，都需要對質(zhì)粒的超螺旋結(jié)構(gòu)進行質(zhì)控檢測。使用SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統(tǒng)，結(jié)合激光誘導(dǎo)熒光檢測器（LIF）和dsDNA 1000 試劑盒（貨號477410），可以對質(zhì)粒的三種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)進行GX分離，并能準(zhǔn)確計算超螺旋百分比，用于質(zhì)粒的純度檢測（圖2）。

圖2  CGE-LIF方法分析質(zhì)粒的純度

02-CE-SDS-LIF方法測定腺相關(guān)病毒衣殼蛋白的純度

腺相關(guān)病毒（AAV）是常用于細(xì)胞/基因ZL的載體，由衣殼蛋白及包裝的核酸組成。AAV具有表達時間長、特異性強、安全性高、免疫原性低等優(yōu)勢，是細(xì)胞/基因ZL中重要的組成部分。AAV衣殼主要分為VP1、VP2和VP3三種蛋白構(gòu)成，三種衣殼蛋白的純度分析是AAV產(chǎn)品質(zhì)量和安全的重要檢測項目；而AAV產(chǎn)品具有多種血清型，且普遍濃度較低，需開發(fā)一種針對不同血清型均具有較高分離度和靈敏度的分析方法。SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統(tǒng)連接激光誘導(dǎo)熒光檢測器（LIF）（圖1）并使用SDS-MW分子量測定試劑盒是分析AAV衣殼蛋白純度的有效方法，檢測結(jié)果如圖3。

圖3. CE-SDS-LIF方法分析AAV衣殼蛋白的純度

03-毛細(xì)管凝膠電泳法（CGE-LIF）分析宿主細(xì)胞殘留DNA的片段分布

生物制品中的疫苗、重組蛋白藥、抗體藥等產(chǎn)品多采用連續(xù)傳代的動物細(xì)胞株表達生產(chǎn)。雖然經(jīng)過嚴(yán)格的純化工藝，但產(chǎn)品中仍有可能殘余宿主細(xì)胞的DNA片段。這些宿主細(xì)胞殘留DNA（HCD）可能帶來傳染性或致瘤性風(fēng)險?，F(xiàn)有研究表明，一個功能基因至少在200 bp以上，因此殘留DNA片段越大，風(fēng)險等級越高。美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）關(guān)于人類基因ZL新產(chǎn)品生產(chǎn)指導(dǎo)文件中明確指出HCD的片段要小于200 bp；國家藥品監(jiān)督總局（NMPA）生物制品藥學(xué)部同樣在基因ZL產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則的征求意見稿中指出，HCD的片段要小于200 bp。因此基因ZL終產(chǎn)品中需要合適的方法檢測HCD的片段大小分布情況。使用SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統(tǒng)，結(jié)合激光誘導(dǎo)熒光檢測器（LIF）和dsDNA 1000 試劑盒（貨號477410），可對HCD進行片段分布檢測（圖4）。

圖4 CGE-LIF方法分析DNA片段標(biāo)準(zhǔn)品的大小

04-cIEF方法測定腺相關(guān)病毒的等電點

腺相關(guān)病毒（AAV）是由結(jié)構(gòu)蛋白與內(nèi)部核酸物質(zhì)組成復(fù)制缺陷性病毒，由于其具有表達時間長、特異性強、安全性高、免疫原性低等優(yōu)勢，被廣泛認(rèn)為是介導(dǎo)基因ZL的理想載體之一。病毒顆粒的衣殼表面暴露的氨基酸側(cè)鏈決定了AAV具有特定的等電點（Isoelectric Point，pI），內(nèi)部核酸的填充情況會造成AAV等電點的差異。AAV是通過重組表達生產(chǎn)，不同的血清型及病毒構(gòu)建的不完整性均可影響產(chǎn)品的等電點，因此等電點的特性可用于鑒別和監(jiān)控AAV的種類和產(chǎn)品質(zhì)量。SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統(tǒng)與cIEF等電點測定試劑盒可以直接分析完整病毒顆粒，不存在污染毛細(xì)管或堵塞毛細(xì)管的情況，是測定AAV等電點的有效方法，檢測結(jié)果如圖5。

圖5. cIEF方法分析AAV的等電點

綜上所述，SCIEX PA 800 Plus藥物分析系統(tǒng)可廣泛應(yīng)用于基因ZL中的質(zhì)粒DNA純度分析、腺相關(guān)病毒衣殼蛋白的純度分析、腺相關(guān)病毒的等電點分析、宿主細(xì)胞殘留DNA的片段分布分析等許多方向，在同一平臺上實現(xiàn)多重表征與應(yīng)用，全面支持監(jiān)管合規(guī)，為您的生物制品成功保駕護航。