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2025-01-10 10:50:46腫瘤微環(huán)境研究
腫瘤微環(huán)境研究聚焦于腫瘤與其周圍細(xì)胞、血管、信號(hào)分子等構(gòu)成的復(fù)雜環(huán)境。這一領(lǐng)域的研究對(duì)于理解腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移機(jī)制至關(guān)重要。它旨在揭示微環(huán)境因素如何影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，以及如何利用這些知識(shí)開發(fā)新的治療策略。主要研究方向包括免疫細(xì)胞與腫瘤相互作用、血管生成調(diào)控、基質(zhì)重塑等，為個(gè)性化腫瘤治療提供科學(xué)依據(jù)。

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2022-12-06 13:04:21探秘腫瘤微環(huán)境，原位“看透”細(xì)胞因子
細(xì)胞因子是腫瘤微環(huán)境（Tumor Microenvironment,TME）中細(xì)胞通訊的關(guān)鍵介質(zhì)，在癌癥的發(fā)生、發(fā)展、治 療和預(yù)后等多個(gè)方面發(fā)揮重要作用。在過去的 40 年中，細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體作為癌癥靶點(diǎn)或癌癥治 療方法得到了廣泛的研究。目前公認(rèn)的臨床前治 療策略為增強(qiáng)干擾素和白細(xì)胞介素（包括 IL-2 ，IL-7 ，IL-12 和 IL-15 ）的生長(zhǎng)抑 制和免疫刺激作用，或抑 制細(xì)胞因子（如 TNF ，IL-1β 和 IL-6 ）的炎癥和促進(jìn)腫瘤的作用[1]。圖 1 . 細(xì)胞因子在腫瘤微環(huán)境中的作用特定細(xì)胞因子的表達(dá)也與腫瘤細(xì)胞的高存活率和高轉(zhuǎn)移性密切相關(guān)。其中促炎細(xì)胞因子 IL-6 和 IL-8 與多種癌癥相關(guān)，包括淋巴瘤、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌和結(jié)腸直腸癌等 [2,3]。因此，分析細(xì)胞因子的表達(dá)是一種重要的診斷工具和預(yù)測(cè)癌癥預(yù)后的關(guān)鍵因素。非放射性的 RNA 原位雜交技術(shù)（ViewRNA ISH）是一種高靈敏度的檢測(cè)細(xì)胞因子表達(dá)的有效方法，并且可以對(duì) 1 至 4 個(gè) mRNA 目標(biāo)進(jìn)行多重分析。檢測(cè)原理如下圖所示：圖 2 .  ViewRNA ISH 檢測(cè)原理安捷倫BioTek Cytation 5 多功能細(xì)胞成像微孔板檢測(cè)系統(tǒng)，可容納多達(dá)四個(gè)熒光通道同時(shí)成像，快速并出色地成多色熒光成像。儀器配備的高內(nèi)涵分析軟件可自動(dòng)計(jì)算細(xì)胞內(nèi) RNA 的表達(dá)水平。Cytation 5 活細(xì)胞成像工作站結(jié)合ViewRNA ISH，為細(xì)胞因子研究提供了一種高效率、高靈敏度和可重復(fù)的檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)案例分享 實(shí)驗(yàn)一．細(xì)胞因子mRNA的成像和分析 為研究細(xì)胞因子mRNA 在不同營養(yǎng)條件下的表達(dá)情況，設(shè)置兩組對(duì)照實(shí)驗(yàn)。陽性對(duì)照細(xì)胞培養(yǎng)于完全培養(yǎng)基中，而陰性對(duì)照細(xì)胞經(jīng)過 18 小時(shí)的血清饑餓處理。隨后加入 ViewRNA 探針以標(biāo)記 IL-6 、IL-8 和 ACTB mRNA ，在Cytation 5 上分別使用 RFP 、GFP 、Cy5 和 DAPI 通道對(duì)探針進(jìn)行成像完成 ISH 細(xì)胞分析。圖像結(jié)果表明：細(xì)胞因子mRNA 的表達(dá)在營養(yǎng)匱乏的條件下會(huì)顯著降低。圖 3 . 陽性和陰性對(duì)照組成像。HCT116 放大 20 倍圖像作為（ A ）陽性對(duì)照和（ B ）陰性對(duì)照。MDA-MB-231 細(xì)胞放大 40 倍的圖像作為（ C ）陽性對(duì)照和（ D ）陰性對(duì)照。藍(lán)色：DAPI 染色的細(xì)胞核；綠色：標(biāo)記 IL-8 mRNA ；橙色：標(biāo)記 IL-6 mRNA ；紅色：標(biāo)記 ACTB mRNA 。接下來為了定量分析細(xì)胞因子表達(dá)，首先在 Cytation 5 的 DAPI 通道下進(jìn)行細(xì)胞核計(jì)數(shù)，以確定每孔的細(xì)胞數(shù)量（圖 4A ）。然后分別在GFP 、RFP 通道進(jìn)行細(xì)胞因子探針（ IL-6 或 IL-8 ）的熒光信號(hào)分析（圖 4B ）。通過細(xì)胞熒光信號(hào)的比率評(píng)估不同實(shí)驗(yàn)條件下的細(xì)胞因子表達(dá)（圖 5 ）。圖 4 . 每個(gè)細(xì)胞的熒光信號(hào)分析。( A ) 使用 Agilent-BioTek Gen5 軟件進(jìn)行細(xì)胞分析圈選出 DAPI 標(biāo)記的細(xì)胞核；( B ) 熒光標(biāo)記的 IL-8 信號(hào)的圖像分析。如圖 5 所示，使用 ViewRNA ISH 和 Cytation 5 這一組合準(zhǔn)確的量化了細(xì)胞內(nèi) IL-6 和 IL-8 mRNA 的表達(dá)。圖 5 . MDA-MB-231 細(xì)胞中 IL-8 表達(dá)和 HCT116 細(xì)胞中 IL-6 表達(dá)，并以細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行校正。 實(shí)驗(yàn)二．誘導(dǎo)細(xì)胞因子 mRNA 的表達(dá) 使用不同劑量的 IL-1β 刺激 DU145 細(xì)胞，以分析細(xì)胞因子的 mRNA 的表達(dá)（圖6）。圖 7 結(jié)果顯示：雖然 IL-6 和 IL-8 的 mRNA 表達(dá)增加，但 IL-8 的表達(dá)變化更為顯著，這與先前研究結(jié)果一致[4]。IL-1β 的最 高劑量下，這兩種細(xì)胞因子的表達(dá)減少則是由于細(xì)胞毒性。這驗(yàn)證了該檢測(cè)方法的可行性與穩(wěn)定性。圖 6 . 不同濃度的 IL-1β 刺激下的 IL-6 、IL-8 和 ACTB 熒光 mRNA 探針信號(hào) ( A ) 0 ng/mL；( B ) 0.02 ng/mL ；0.128 ng/mL；( D ) 0.8 ng/mL。藍(lán)色：DAPI染色的細(xì)胞核；綠色：標(biāo)記的IL-8 mRNA；橙色：標(biāo)記的 IL-6 mRNA ；紅色：標(biāo)記的 ACTB mRNA 。圖 7 . 不同濃度的 IL-1β 刺激下 DU145 細(xì)胞中 IL-6 和 IL-8 mRNA 的表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)三．抑 制細(xì)胞因子 mRNA 的表達(dá) 研究表明絲裂原活化蛋白激酶（ MAPK ）可調(diào)節(jié) IL-8 ，并證明用 MAPK/ERK 抑 制劑 U 0126 治 療可減少 DU145 和 MDA-MB-231 細(xì)胞中的炎癥細(xì)胞因子[4,5]。為了確認(rèn)這一現(xiàn)象并驗(yàn)證 ViewRNA ISH 和 Cytation 5 這一組合的能力，將不同濃度的 U 0126 加入到每種細(xì)胞類型中孵育 30 分鐘。然后用 1 ng/mL 的 IL-1β 刺激 DU145 細(xì)胞達(dá) 3 小時(shí)，而 MDA-MB-231 細(xì)胞未被刺激。使用 GFP 和 RFP 通道進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和圖像分析以評(píng)估在 U 0126 治 療后 IL-8 和 IL-6 細(xì)胞因子 mRNA 的表達(dá)。采集的圖像（圖 8 ）和計(jì)算的熒光信號(hào)強(qiáng)度 （圖 9 ）證實(shí)了 U 0126 的抑 制作用。此外，也驗(yàn)證了該方法的靈敏度，可以準(zhǔn)確識(shí)別給予抑 制劑后 mRNA 的表達(dá)變化。圖 8. U 0126 抑 制 IL-8 mRNA 的表達(dá)。圖像顯示了在不同濃度的 U 0126 處理后 ( A-E ) MDA-MB-231 細(xì)胞內(nèi) IL-6 、IL-8 和 ACTB 熒光 mRNA 探針信號(hào)；( F-J ) 為 DU145 細(xì)胞。藍(lán)色：DAPI 染色的細(xì)胞核；綠色：標(biāo)記的 IL-8 mRNA ；橙色：標(biāo)記的 IL-6 mRNA ；紅色：標(biāo)記的 ACTB mRNA 。圖 9 . U 0126 治療后 IL-8 和 IL-6 mRNA 在 MDA-MB-231 和 DU 145 細(xì)胞中的表達(dá)結(jié) 語ThermoFisher 的 ViewRNA ISH 細(xì)胞分析試劑盒和探針提供一種靈敏的方法來檢測(cè) mRNA 表達(dá)。該方法在安捷倫BioTek Cytation 5 細(xì)胞成像系統(tǒng)的加持下得以更更快地采集多熒光通道的圖像，并更精 準(zhǔn)的計(jì)算出每一個(gè)細(xì)胞的熒光信號(hào)強(qiáng)度。這種檢測(cè)、成像和分析的完 美結(jié)合提供了一種靈敏、靈活和高通量的方法用以檢測(cè)細(xì)胞因子 mRNA 的表達(dá)。參考文獻(xiàn)：[1] Propper DJ, Balkwill FR. Harnessing cytokines and chemokines for cancer therapy. Nat Rev Clin Oncol. 2022 Apr;19(4):237-253.[2] Kampan NC, Xiang SD, McNally OM, Stephens AN, Quinn MA, Plebanski M. Immunotherapeutic Interleukin-6 or Interleukin-6 Receptor Blockade in Cancer: Challenges and Opportunities. Curr Med Chem. 2018;25(36):4785-4806.[3] Vecchi L, Mota STS, Zóia MAP, Martins IC, de Souza JB, Santos TG, Beserra AO, de Andrade VP, Goulart LR, Araújo TG. Interleukin-6 Signaling in Triple Negative Breast Cancer Cells Elicits the Annexin A1/Formyl Peptide Receptor 1 Axis and Affects the Tumor Microenvironment. Cells. 2022 May 20;11(10):1705.[4] Kooijman R, Himpe E, Potikanond S, Coppens A. Regulation of interleukin-8 expression in human prostate cancer cells by insulin-like growth factor-I and inflammatory cytokines. Growth Horm IGF Res. 2007 Oct;17(5):383-91.[5] Chelouche-Lev D, Miller CP, Tellez C, Ruiz M, Bar-Eli M, Price JE. Different signalling pathways regulate VEGF and IL-8 expression in breast cancer: implications for therapy. Eur J Cancer. 2004 Nov;40(16):2509-18. 
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2022-12-30 11:31:56繪制人類腫瘤微環(huán)境的空間圖譜
介紹和目標(biāo)免疫系統(tǒng)對(duì)癌癥治 療的反應(yīng)可以反映患者在治 療之后是否會(huì)有良好的結(jié)果。了解腫瘤微環(huán)境（TME）在腫瘤發(fā)生和治 療反應(yīng)中的變化對(duì)制定個(gè)性化的治 療方案并改善癌癥治 療至關(guān)重要。借助穩(wěn)定和全面的超多標(biāo)成像技術(shù)，可使用免疫標(biāo)志物探查髓系和淋巴系細(xì)胞的譜系和結(jié)構(gòu)，而且結(jié)合特定腫瘤生物標(biāo)志物時(shí)，還可以捕捉多種腫瘤中TME內(nèi)的免疫反應(yīng)。細(xì)胞類型特征模式，結(jié)合超多標(biāo)組織成像的探查能力，可以針對(duì)免疫細(xì)胞群和TME內(nèi)眾多類型細(xì)胞的空間相互作用提供之前無法獲得的全新認(rèn)識(shí)。Cell DVE超多標(biāo)成像分析整體解決方案可以使用循環(huán)染色和染料失活流程對(duì)一個(gè)完整組織切片上的數(shù)十個(gè)生物標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)和成像。Cell DIVE的核心是一個(gè)精確、靈活、開放的多標(biāo)記成像解決方案，可以靈活選擇多標(biāo)記成像研究中常用的生物標(biāo)志物抗體。Cell Signaling Technology(CST)擁有豐富的經(jīng)IHC驗(yàn)證的抗體組合，可檢測(cè)TME中的關(guān)鍵蛋白質(zhì)，實(shí)現(xiàn)組織中的免疫細(xì)胞檢測(cè)和表型判斷。CST提供抗體偶聯(lián)物，這些偶聯(lián)物均經(jīng)過驗(yàn)證，可用于Cell DIVE上，并提供經(jīng)IHC驗(yàn)證抗體與熒光團(tuán)和其他檢測(cè)試劑的定制化偶聯(lián)。CST采用嚴(yán)格的IHC驗(yàn)證方法，隨后還會(huì)在Cell DIVE平臺(tái)上進(jìn)行驗(yàn)證，可確保成功檢測(cè)蛋白質(zhì)。在本研究中，我們展示了使用由數(shù)十種CST生物標(biāo)志物抗體?組成的新型檢測(cè)模式，在多種組織類型中進(jìn)行的Cell DIVE超多標(biāo)成像。多標(biāo)記檢測(cè)模式的開發(fā)所需的優(yōu)化極少，可識(shí)別復(fù)雜的細(xì)胞類型，并揭示腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞間相互作用。結(jié) 果表征腫瘤微環(huán)境有助于理解導(dǎo)致患者預(yù)后不佳的新機(jī)制。腫瘤微環(huán)境比較復(fù)雜，通常在單個(gè)樣本和不同患者樣本中都是異質(zhì)的。循環(huán)多標(biāo)記染色和成像可在不同組織樣本中實(shí)現(xiàn)TME探查，即使可用組織有限的情況下。在這項(xiàng)研究中，我們檢查了12個(gè)完整組織或TMA切片中30多個(gè)生物標(biāo)志物的表達(dá)（表1），重 點(diǎn)是潛在的免疫治 療目標(biāo)、預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物和分割標(biāo)志物。所有的CST生物標(biāo)志物抗體均被連接并隨機(jī)分配到一個(gè)回合。表1.研究設(shè)計(jì)：抗體和組織為了在TME中其他細(xì)胞的背景下定義免疫細(xì)胞，融合并分割了所有的生物標(biāo)志物圖像，并使用聚類分析和降維（UMAP）對(duì)表達(dá)進(jìn)行分析。聚類分析提供了一個(gè)無偏見的方法來定義組織內(nèi)的免疫細(xì)胞貢獻(xiàn)。在這項(xiàng)研究中，我們展示了人類結(jié)腸腺癌（CAC；圖1）的聚類分析。在這里，聚類分析將白細(xì)胞從所有其他上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞類型中區(qū)分出來（圖1C）。此外，聚類清楚地定義了淋巴細(xì)胞和骨 髓細(xì)胞類別。CAC中的骨 髓類亞型包括骨 髓祖細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞和另外兩個(gè)未知亞型的骨 髓聚類。其他生物標(biāo)志物可用于進(jìn)一步定義亞型。對(duì)于淋巴類，定義了T細(xì)胞和NKT細(xì)胞聚類。另外，還確定了一個(gè)具有CD20陽性的T細(xì)胞聚類。使用機(jī)器學(xué)習(xí)進(jìn)行單細(xì)胞表型分析，可以從聚類中進(jìn)一步定義細(xì)胞類型。例如，在圖像1D中，聚類15中的一個(gè)細(xì)胞是CD45+ CD3+ CD8+ CD4+ GRZB+ Ki67+ LAG3+ PD1+TIM3+（圖1D-E；橙色圈）。聚類和單細(xì)胞空間分析被應(yīng)用于研究中的所有其他組織（圖2；數(shù)據(jù)未顯示）。圖1：CST檢測(cè)模式的多標(biāo)成像可在一張玻片上檢查結(jié)腸腺癌（CAC）組織的免疫細(xì)胞成分（圖1 A）。用多種生物標(biāo)志物對(duì)玻片進(jìn)行反復(fù)染色和成像（表1；圖1 A、B、D板）。使用全套30種生物標(biāo)志物進(jìn)行分割后，聚類分析顯示了組織內(nèi)的免疫細(xì)胞（1C-H所示為CAC，正常結(jié)腸組織未顯示）。聚類15（圖1D-F）被突出顯示，一個(gè)跨生物標(biāo)志物的特定細(xì)胞用一個(gè)橙色的圓圈突出顯示（圖1D）。降維（UMAP；圖1G）表示免疫細(xì)胞和其他聚類之間的關(guān)系。圖2：CST檢測(cè)模式在多種癌癥和正常組織類型中的多標(biāo)成像。玻片被反復(fù)染色和成像（表1；圖2組織類型）。所有生物標(biāo)志物顯示在一張圖像中。使用全套30種生物標(biāo)志物進(jìn)行分割后，聚類分析顯示了組織內(nèi)的免疫細(xì)胞（數(shù)據(jù)未顯示）。組織特定的免疫細(xì)胞聚類是由特定的生物標(biāo)志物表達(dá)模式統(tǒng)計(jì)出來的。在聚類之后，單細(xì)胞表型能夠?qū)垲愔械募?xì)胞群進(jìn)行空間分析。方法和材料CST抗體經(jīng)過了嚴(yán)格的驗(yàn)證，以確保抗體在FFPE組織上的表現(xiàn)。本研究中的所有抗體都是直接偶聯(lián)或商業(yè)偶聯(lián)物成品（表1）。偶聯(lián)是使用非位點(diǎn)特異性化學(xué)方法進(jìn)行的?？贵w與四種不同的染料過量偶聯(lián)，去除未結(jié)合的染料，并通過分光光度分析測(cè)量標(biāo)記的程度。經(jīng)過初步驗(yàn)證，具有最 佳標(biāo)記程度和濃度的偶聯(lián)抗體溶液隨后用于對(duì)各種人類癌癥組織和正常組織的染色。組織從商業(yè)來源獲得（Pantomics；表1）。在Cell DIVE上使用四通道+DAPI對(duì)組織進(jìn)行成像，并自動(dòng)進(jìn)行自發(fā)熒光去除、校正和拼接。使用徠卡顯微系統(tǒng)開發(fā)的專 利軟件全拼接圖像進(jìn)行導(dǎo)入、融合和分析。結(jié) 論使用Cell DIVE超多標(biāo)組織成像分析整體解決方案，用30多種CST生物標(biāo)志物抗體對(duì)12個(gè)完整的組織和TMA切片進(jìn)行循環(huán)染色和成像。 這個(gè)CST檢測(cè)模式能夠識(shí)別含有不同免疫類別、細(xì)胞類型和亞型的細(xì)胞的集群。Cell DIVE超多標(biāo)組織成像分析整體解決方案可保存組織，未來進(jìn)一步定義免疫細(xì)胞亞型的工作可以繼續(xù)使用同一組織切片上的其他CST抗體，并與研究中所有先前的生物標(biāo)志物疊加。相關(guān)產(chǎn)品超多標(biāo)組織成像分析整體解決方案Cell DIVE
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2022-07-20 13:38:49光聲成像材料 | 腫瘤微環(huán)境激活的光聲成像顯影劑
在生物成像和光診療學(xué)領(lǐng)域，通過對(duì)材料的結(jié)構(gòu)調(diào)整以控制其光學(xué)性質(zhì)是探索新材料，發(fā)現(xiàn)新應(yīng)用的重要且常見方式。貴金屬就是其中較為主要的一類原料，但通常的貴金屬材料存在兩個(gè)明顯缺點(diǎn)：一、激發(fā)波長(zhǎng)通常落在可見光和近紅外一區(qū)（NIR-I，700 – 1000 nm），這使得成像的深度降低，同時(shí)無法與組織發(fā)生明顯的作用；二、該類材料通常不具備激活功能（即始終在線，Always-on），使得難以從成像中分辨目標(biāo)和其他無關(guān)組織，同時(shí)可能會(huì)存在未知副反應(yīng)。 在這樣的背景下，作者Chunyu Zhou等人將目標(biāo)放在更高信噪比、更大成像深度的近紅外二區(qū)（NIR-II，1000 – 1700 nm），開發(fā)能夠?qū)δ[瘤微環(huán)境進(jìn)行響應(yīng)的貴金屬納米材料。該材料以金納米粒子（Gold nanoparticles，AuNPs）為主體（見圖1），在乙醇和水的混合體系中使其形成納米鏈（Nanochain）。之后引入Tetraethyl orthosilicate，（TEOS），水解后包裹金納米鏈，形成核鞘結(jié)構(gòu)（Core-sheath nanostructure，AuNCs@SiO2）。注射至小鼠體內(nèi)后，因腫瘤微環(huán)境（Tumor microenvironment，TME）中高H2O2水平觸發(fā)鄰近金納米顆粒在AuNCs@SiO2的有限局部空間內(nèi)融合，從而產(chǎn)生了具有強(qiáng)NIR-II吸收的串狀結(jié)構(gòu)。 圖1：AuNCs@SiO2作用示意圖因AuNCs@SiO2具有TME激活特性，因此不容易受其他組織的影響，表現(xiàn)出優(yōu)異的光聲成像性能（圖2）。 圖2：正常組織與腫瘤組織的超聲、光聲成像對(duì)比 同時(shí)，AuNCs@SiO2在1064 nm處光熱轉(zhuǎn)換效率高達(dá)82.2%（圖3），可導(dǎo)致癌細(xì)胞嚴(yán)重死亡，顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)（圖4、5、6）。 圖3：AuNCs@SiO2與其他已報(bào)道的光熱治療試劑的轉(zhuǎn)換效率對(duì)比：1) AuNCs@SiO2; 2) Au3Cu@PEG TPNCs; 3) Au-wires-on-AuNR; 4) Pt Spiral; 5) Cu2MnS2 NPs; 6) Nb2C (Mxene); 7) Cu3BiS3 NRs; 8) L-Pdots; 9) TBDOPV-DT NPs; 10) SPN-DT圖4：注射PBS和AuNCs@SiO2的荷4T1瘤小鼠光熱紅外熱成像（1064 nm NIR-II激光，0.5 W/cm2）圖5：注射PBS和AuNCs@SiO2后，腫瘤部位溫度與照射時(shí)長(zhǎng)的變化趨勢(shì) 圖6：接受相應(yīng)治療后的小鼠腫瘤大小對(duì)比（I：PBS；II：AuNCs@SiO2；III：PBS+Laser；IV：AuNCs@SiO2+Laser）  總結(jié)：作者成功合成出具有TME響應(yīng)的、同時(shí)具有光聲成像和光熱治療功能的二氧化硅包裹自組裝金納米鏈。通過TME中高濃度H2O2水，使金納米粒子表面檸檬酸氧化，進(jìn)而脫離納米粒子表面，導(dǎo)致金納米粒子融合，產(chǎn)生強(qiáng)NIR-II吸收。這一新型材料或許能夠?yàn)闇?zhǔn)確非侵入性診療打開新的大門。 美國PhotoSound 小動(dòng)物3D光聲/熒光成像系統(tǒng) (PAFT) 美國PhotoSound小動(dòng)物全身3D光聲/熒光成像系統(tǒng)(PAFT)為小動(dòng)物活體成像和表征提供了完整的解決方案。該系統(tǒng)集成了三種互補(bǔ)的三維成像模式：光聲成像(PAT)、熒光成像(FMT)、生物發(fā)光成像(BLT)，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)小動(dòng)物的3D光聲、3D熒光和3D生物發(fā)光成像,該系統(tǒng)可為生物組織提供高分辨率、高對(duì)比的解剖學(xué)成像效果。 可實(shí)現(xiàn)近紅外一區(qū)和近紅外二區(qū)（670-2600 nm）小鼠全身3D光聲/熒光成像系統(tǒng)，采用OPO可調(diào)式激光器，提供670-2600 nm連續(xù)脈沖激光、完全3D光聲成像(具有100 um等向分辨率的完全三維成像，非切片疊加成像)、高通量 (256個(gè)電子通道)、靈敏度高(60 nM ICG )、桌面式設(shè)計(jì)，方便使用、成像速度快 (完成一次3D掃描需30秒)。  往期回顧● 美國PhotoSound小動(dòng)物全身3D光聲/熒光成像系統(tǒng)● 小鼠解剖應(yīng)用筆記 —— 美國PhotoSound小動(dòng)物全身3D光聲/熒光成像系統(tǒng)● 光聲成像應(yīng)用 | 探尋動(dòng)脈粥樣硬化斑塊 
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2022-04-29 12:54:04直播回顧 | 抽絲剝繭，超多重免疫標(biāo)記解密腫瘤微環(huán)境之奧秘
4月20日上午，徠卡與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)網(wǎng)共同舉辦了網(wǎng)絡(luò)研討會(huì)——“抽絲剝繭，超多重免疫標(biāo)記解密腫瘤微環(huán)境之奧秘”。徠卡生命科學(xué)部的高級(jí)應(yīng)用專員劉繼紅和Cell DIVE應(yīng)用科學(xué)家Michael Smith為廣大觀眾揭示了CELL DIVE 超多重標(biāo)記解決方案如何輕松應(yīng)對(duì)復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境，為臨床腫瘤的研究和治 療提供了優(yōu)秀的研究工具。Indica Labs應(yīng)用科學(xué)家趙永田重 點(diǎn)介紹了在HALO中對(duì)獲取的Cell DIVE圖像的處理、分析步驟以及如何進(jìn)行高緯的空間生物學(xué)分析，用以了解腫瘤微環(huán)境中腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞的相互作用關(guān)系對(duì)研究腫瘤免疫應(yīng)答的作用機(jī)制。01CELL DIVE使用的抗體是開放的嗎？有大約多少種經(jīng)過驗(yàn)證的抗體？A：CELL DIVE 的抗體是開放的，有350種以上的抗體經(jīng)過驗(yàn)證的抗體可以使用。02CELL DIVE可以在臨床上用嗎，是否有注冊(cè)證？A：目前沒有注冊(cè)證，正在申請(qǐng)中。03這個(gè)平臺(tái)的檢測(cè)聯(lián)系哪位呢？A：可以聯(lián)系Leica公司各地的應(yīng)用支持和銷售。04這個(gè)染色是儀器自動(dòng)染色嗎？A：可以手動(dòng)染色也可以和自動(dòng)染色儀聯(lián)用自動(dòng)染色。05哪個(gè)實(shí)驗(yàn)室可以檢測(cè)？A：Leica公司有DEMO機(jī)，可以提供一定的演示。06成像是全片還是一個(gè)視野？A：成像儀可以選擇全片成像或者選取一個(gè)或多個(gè)視野成像。07怎樣避免非特異性染色 ？核陽性的和胞漿包膜可以隨意搭配嗎？A：首先要選擇特異性好的抗體，我們抗體庫的抗體都是經(jīng)過驗(yàn)證的抗體。細(xì)胞核陽性和胞漿包膜理論上可以自由搭配。08每一輪染完了，除了染料失活，是不是還需要去除一抗？A：每一輪染色成像完成，染料失活 不需要去除一抗。09CELL DIVE是不需要摸索一抗?jié)舛鹊膯?，固定的protocol會(huì)不會(huì)造成有的組織染不出來有的組織卻染色過強(qiáng)？A：徠卡的protocol適用于絕大多數(shù)的組織，有些組織的某個(gè)marker 表達(dá)特別高或者特別低，可能需要修改抗體濃度。10抗體是什么方法學(xué)檢測(cè)標(biāo)記？除了主講人介紹的熒光濾鏡，能否使用其他的熒光標(biāo)記和濾鏡？A：抗體驗(yàn)證時(shí)參照同樣marker的免疫組化的結(jié)果；為了減少串色的發(fā)生，我們推薦使用Cy2、Cy3、Cy5、Cy7光譜基本相同的染料標(biāo)記。11成像也是設(shè)備自動(dòng)化進(jìn)行的嗎？A：成像時(shí)設(shè)備自動(dòng)進(jìn)行的，但是可以在拍照前根據(jù)樣本的染色情況進(jìn)行優(yōu)化。12Did you find any nonspecific staining while utilizing the different CD markers for immune cells?（Michael Smith）A：The Cell DIVE solution comes with a list of 350+ antibodies that have been validated for use with the workflow, and for specificity and sensitivity. For antibodies that are not used from the list, we provide details on a three part antibody validation process that also ensures that antibodies used are specific. In the case of residual nonspecific signal, this is likely removed by the autoflourescence imaging and removal of that signal that occurs at every round. So, in our hands, nonspecific staining is minimized at the level of antibody quality control and the image processing that the software performs.13關(guān)于細(xì)胞間鄰近距離的分析，我們?nèi)绾卧O(shè)定所計(jì)算的距離范圍？A：關(guān)于細(xì)胞間鄰近距離的分析，所定義距離的范圍目前還沒有相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。考慮到不同細(xì)胞亞型的相互作用，不同免疫細(xì)胞亞群之間鄰近距離的設(shè)定可能需要不同的標(biāo)準(zhǔn)。在分析中，HALO可以對(duì)距離進(jìn)行設(shè)定，并按照不同的區(qū)間（例如0~5μm，5~10μm，10~15μm……）給出鄰近細(xì)胞的數(shù)量和密度。分析中先進(jìn)行預(yù)分析，根據(jù)不同距離范圍內(nèi)免疫細(xì)胞的密度和臨床信息進(jìn)行相關(guān)性分析。再把確定的距離應(yīng)用到所用的樣本切片中。14在分析過程中，我們可以選擇局部視野進(jìn)行分析嗎？還是僅能對(duì)全組織切片進(jìn)行分析？A：分析中，我們建議針對(duì)全景組織切片進(jìn)行分析，但HALO也可以定義ROI區(qū)域進(jìn)行選擇性的視野進(jìn)行分析。這兩種分析方法在HALO里都可以實(shí)現(xiàn)的。
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2022-10-26 14:08:22倒置熒光顯微鏡用于熒光微球研究
熒光微球形狀為球形，直徑在幾納米至幾十微米之間，微球表面或內(nèi)部負(fù)載有熒光物質(zhì)，在受到一定的能量激發(fā)時(shí)能夠發(fā)出熒光的微粒。與純熒光化合物相比，熒光微球具有相對(duì)穩(wěn)定的發(fā)光行為和形態(tài)結(jié)構(gòu)。熒光微球作為一種特殊的功能微球，由于在單個(gè)微球中富集了能夠發(fā)射熒光的有機(jī)或無機(jī)物質(zhì)，除具有無機(jī)物和有機(jī)物的性能外，同時(shí)在外界能量刺激下還能發(fā)射熒光，因此在眾多領(lǐng)域都具有廣泛的應(yīng)用，如生物化學(xué)、生物醫(yī)藥、臨床醫(yī)學(xué)、基因分析以及光學(xué)儀器等，其中熒光微球在醫(yī)藥、生物方面的應(yīng)用尤為重要。近期有位客戶需要一臺(tái)倒置熒光顯微鏡用于熒光微球研究，明美銷售經(jīng)理推薦倒置熒光顯微鏡MF52-N搭配顯微鏡相機(jī)MS23。采用倒置熒光顯微鏡MF52-N搭配顯微鏡相機(jī)MS23拍攝熒光微球倒置熒光顯微鏡MF52-N,由LED落射熒光顯微系統(tǒng)與倒置生物顯微系統(tǒng)組成，采用優(yōu)良的無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)，配置長(zhǎng)工作距離平場(chǎng)物鏡與大視野目鏡。物鏡成像清晰無場(chǎng)曲光暈，襯度較高。整理清晰度好，獲得用戶的認(rèn)可。如果您對(duì)熒光微球顯微鏡感興趣或有疑問，歡迎與我們聯(lián)系，期待與您相約！本文網(wǎng)址：http://www.mshot.com.cn/kehuanli/20220930.html，轉(zhuǎn)載請(qǐng)保留出處，謝謝！
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