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由HP公司(現(xiàn)Agilent公司)提供的氨基酸分析方法,
原理:一級氨基酸與鄰苯二甲醛(OPA)柱前衍生,二級氨基 酸與9-芴基(FMOC)柱前衍生,經(jīng)反相GX液相色譜分離測定氨基酸的含量。
進(jìn)樣程序: 10 從管3中吸取0.0 μL (洗針) 20 從管4中吸取5.0 μL (吸緩沖液) 30 從管3中吸取0.0 μL (洗針) 40 從管1中吸取1.0 μL (吸OPA) 50 從管3中吸取0.0 μL (洗針) 60 從樣品中吸取1.0 μL (吸樣品或標(biāo)準(zhǔn)溶液) 70 從管3中吸取0.0 μL (洗針) 80 以200 μL/min的速度混合7.0 μL,重復(fù)20次 (混合使反應(yīng)) 90 從管2吸1.0 μL (吸FMOC) 100 以300 μL/min的速度混合8.0 μL,重復(fù)30次 (混合使反應(yīng)) 110 進(jìn)樣 (注入色譜柱)
注:管1--OPA,管2--FMOC, 管3--水,管4--緩 沖液 硼酸緩沖液(0.4 mol/L) OPA (Phthaldialdehyde, 10 mg/mL) FMOC (9- Fluorenylmethyl, chloroformate,5 mg/mL)
流動相:A:2.0 g醋酸鈉+500 mL水,加130 μL三乙胺和5 mL四氫呋喃調(diào)pH=7.2 B:2.0 g醋酸鈉+100 mL水,調(diào)pH=7.2,加入乙腈:甲醇(1:1)400 mL
流速:1.0 mL/min?
柱溫:40 ℃
檢測器:Agilent VWD (0-16.0min:338nm,16.0min變波長262nm至結(jié)束)
進(jìn)樣量:1.0 μL
1,Asp天門冬氨酸;2,Glu谷氨酸;3,Ser絲氨酸;4,His組氨酸;5,Gly甘氨酸;6,Thr蘇氨酸;7,Cys胱氨酸;8,Ala丙氨酸;9,Arg精氨酸;10,Tyr酪氨酸;11,Val纈氨酸;12,Met蛋氨酸;13,Trp色氨酸;14,Phe苯丙氨酸;15,Ile異亮氨酸;16,Leu亮氨酸;17,Lys賴氨酸;18,Pro脯氨酸
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