目的

采用Thermo ScientificTM ISQTM 7610氣質(zhì)聯(lián)用儀，結(jié)合LPGC技 術(shù)，建立了通過測(cè)定小麥粉中戊聚糖酶解后兩種主要成分阿拉 伯糖、木糖衍生物的含量以表示戊聚糖含量的快速分析方法。

引言

戊聚糖，是一種非淀粉多糖，在谷物（如小麥、黑麥、高粱 等）中廣泛存在，但含量極少。它是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的重要 成分；大多數(shù)谷物的糊粉層細(xì)胞外薄壁和胚乳層細(xì)胞外薄壁的 60%-70%是由戊聚糖構(gòu)成。戊聚糖對(duì)維持植物生命具有極其重 要的作用。戊聚糖在面粉中的含量雖然很少，但它卻可以吸收 相當(dāng)于自身重量4倍的水分。其高粘度增加了面筋和淀粉膜的強(qiáng) 度與延展性，使蛋白質(zhì)泡沫的抗熱破裂能力增強(qiáng)，提高了面團(tuán) 的持氣性，從而使發(fā)酵過程中生產(chǎn)的CO2 擴(kuò)散速率得到延緩， 面制品的芯質(zhì)構(gòu)更加細(xì)膩和均勻。因此，戊聚糖的含量對(duì)面團(tuán) 的吸水率和持氣性能有一定的影響，從而影響植物源食品的品 質(zhì)。

LPGC技術(shù)利用質(zhì)譜的真空加速分析，在3-4倍提升分析效率的 同時(shí)實(shí)現(xiàn)相同程度的分離。同時(shí)能夠節(jié)省不必要的載氣、電量 等消耗。更重要的是，對(duì)于衍生化樣品可避免待測(cè)樣品在等待 過程中發(fā)生降解或二次反應(yīng)而影響穩(wěn)定性。 

綜上所述，LPGC技術(shù)在不影響方法學(xué)指標(biāo)的前提下，能夠?qū)崿F(xiàn) 快速分析，對(duì)于需要衍生化后的樣品分析是極其有必要的。文章選擇常見的小麥粉作為本試驗(yàn)的樣品，使用結(jié)合LPGC技術(shù)的 ISQ 7610系統(tǒng)對(duì)其中戊聚糖的含量進(jìn)行了分析。

實(shí)驗(yàn)部分

樣品制備

酶解：準(zhǔn)確稱取固態(tài)樣品50mg于25mL的蒸餾水（pH=6.0） 中，攪拌至完全溶解。稱取6.0mg木聚糖酶，溶解于5mL蒸餾 水中，待酶溶解后加入到戊聚糖樣品溶液，40℃水浴加熱振蕩 反應(yīng)50min。樣品水浴干燥，待衍生。

衍生化：在上述待衍生物中加入10.0 mg鹽酸羥胺，0.5 mL吡 啶，振蕩溶解，移入烘箱，90℃反應(yīng)30 min，取出冷卻至室 溫。加入0.5 mL醋 酸 酐，于90℃烘箱反應(yīng)30 min。衍生化后溶 液氮吹吹干，加入二氯甲烷定容至5 mL，溶液搖勻后過有機(jī)濾 膜，濾液待上機(jī)測(cè)定。

標(biāo)曲工作液制備 分別稱取0.25 mg、0.375 mg、1 mg、2 mg、7 mg阿拉伯糖 和木糖單糖，按照上述方法進(jìn)行衍生化實(shí)驗(yàn)，氮吹吹干后加入 二氯甲烷定容至25 mL，配制成至少5個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列， 使得阿拉伯糖和木糖單糖衍生物的質(zhì)量濃度分別為10.0 μg/ mL、15.0 μg/mL、40.0 μg/mL、80 μg/mL、280 μg/mL。 

為驗(yàn)證LPGC-MS技術(shù)對(duì)衍生樣品的穩(wěn)定性，選取標(biāo)曲最低濃度 點(diǎn)10.0 μg/mL衍生化樣品進(jìn)行重復(fù)性測(cè)定（8針）。

數(shù)據(jù)處理

使用Thermo ScientificTM Chromeleon色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)（CDS）變色龍軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、處理和報(bào)告分析，該軟件可同時(shí)實(shí)現(xiàn)儀 器控制、方法開發(fā)、定量/定性分析以及報(bào)告編輯。此外，變色龍軟件可以自定義顯示所需的信息，也支持標(biāo)記、數(shù)據(jù)追蹤等設(shè)置，輕松滿足規(guī)范要求。

結(jié)果和討論

LPGC技術(shù) 傳統(tǒng)的快速氣相分析方法，主要通過增大柱流速、提高升溫速率、薄膜加窄內(nèi)徑的短柱以及氫氣做載氣等方法。但由于氫氣會(huì)導(dǎo) 致一些分析物的分解，減少惰性金屬表面以及存在易燃易爆安全隱患而未被廣泛使用，而薄膜和窄內(nèi)徑均會(huì)降低色譜柱的樣品承載量。

回收率和實(shí)際樣品測(cè)定 回收率：在基質(zhì)樣品中加入標(biāo)液，使其終濃度為40 μg/mL，并做三個(gè)樣品平行，按照上述前處理方法進(jìn)行酶解及衍生化，然后進(jìn) 樣分析，測(cè)定目標(biāo)化合物含量，計(jì)算回收率，如表6所示。 實(shí)際樣品測(cè)定：按照上述方法稱取小麥粉樣品，進(jìn)行前處理并進(jìn)樣分析，得到譜圖如圖4，樣品定量結(jié)果如表7所示。

結(jié)論

試驗(yàn)采用LPGC技術(shù)，結(jié)合ISQ 7610氣質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)小麥粉中戊聚糖含量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，LPGC技術(shù)在測(cè)定衍生化處理樣品時(shí) 穩(wěn)定性較好，效率較高，能夠有效防止樣品在等待過程中發(fā)生降解或二次反應(yīng)。與常規(guī)色譜柱方法相比，在保證同等分離要求的同時(shí)，體現(xiàn)了較強(qiáng)的抗基質(zhì)干擾能力，保證了靈敏度，該方法可作為戊聚糖定量或篩查方法使用。

標(biāo)簽：LPGC-MS