一、樣品提取 

稱取 5.0 g 樣品于 50 mL 離心管中，加入濃度為 1 μg/mL 同 位素內(nèi)標(biāo)利巴韋林 -13C5 溶液 10 μL，加入 12 mL 20 g/L 三氯 乙酸水溶液和 2.5 mL 乙腈，渦旋混勻 30 s，超聲 10 min，于 8000 r/min 離心 5 min，上清液全部轉(zhuǎn)移至 50 mL 離心管中， 再向樣品中加入10 mL 20 g/L三氯 乙酸水溶液重復(fù)提取一次， 合并兩次提取液，用三氯 乙酸水溶液定容至 25 mL，再準(zhǔn)確移 取 5 mL，用氨水調(diào)節(jié) pH 至 8.5（±0.1）待凈化（本實(shí)驗(yàn)是采 用陰性樣本做基質(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，故省略酶解步驟）。 

二、SPE 凈化（Copure? PBA, 100 mg/3 mL） 

活化：向 PBA 柱中依次加入 3 mL 乙腈，3 mL 0.25 mol/L 乙 酸銨緩沖液（pH=8.5）進(jìn)行活化。 

上樣和洗脫：取上述待凈化液過(guò)柱，控制流速不超過(guò) 1 滴 / 秒， 然后用 3 mL 0.25 mol/L 乙酸銨緩沖液（pH=8.5）淋洗小柱， 棄去全部流出液，抽干小柱，用 2 mL 0.1 mol/L 甲酸水溶液 洗脫，抽干小柱，收集全部洗脫液。 

上機(jī)：取上述洗脫液過(guò) 0.22 μm PES 水系濾膜，供上機(jī)分析。 

三、標(biāo)曲配制 

采用內(nèi)標(biāo)法定量，分別精密量取適量的利巴韋林標(biāo)準(zhǔn)溶液和同 位素內(nèi)標(biāo)利巴韋林 -13C5 工作液，用 0.1 mol/L 甲酸水溶液配 制成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。 

四、儀器條件 色譜條件 

儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura） 色譜柱：CS211003H（HILIC，2.1 mm×100 mm，3 μm） 流動(dòng)相：A：5 mmol/L 乙酸銨溶液（含 0.1% 甲酸）   B：乙腈 洗脫方式：梯度洗脫，見表 1 

表 1 梯度洗脫程序