一、樣品提取 

準(zhǔn)確移取飼料 1.0 g 于 50 mL 離心管中加入 25 mL 乙腈，渦旋 1 min 分散均勻，65℃超聲提取 15 min，每隔 5 min 手搖一次。 3800 r/min 離心 15 min。取上清液 5 mL 于 100 mL 雞心瓶中， 50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。往雞心瓶中加 2% 甲酸水溶液 5 mL，超聲 2 min，渦動(dòng) 1 min 充分溶解，備用。 

二、SPE 柱凈化（Copure? MCX，60 mg/3 mL） 

活化：MCX 固相萃取柱使用前用 3 mL 甲醇、3 mL 2% 甲酸水溶 液活化。 

上樣和洗脫：往固相萃取柱中加入 2% 甲酸水溶液提取備用 液，棄去流出液；加入 3 mL 水淋洗，棄去淋洗液 3 mL 固 相萃取柱洗脫液（1% 氨水溶液：甲醇 =3:7）洗脫收集洗脫 液 ( 整個(gè)上樣淋洗洗脫過程中流速控制在 1 mL/min 以內(nèi) )。 

重新溶解：50℃緩慢氮?dú)饬鳁l件下吹至近干，加 1 mL 流動(dòng)相 復(fù)溶，0.22 μm 濾膜過濾，濾液上機(jī)測(cè)試。 

三、儀器條件 

設(shè) 備：Waters Alliance 2695 色譜柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) 檢測(cè)器：Waters 2487 紫外檢測(cè)器 檢測(cè)波長(zhǎng)：365 nm 流動(dòng)相：A：乙腈   B：0.05% 乙酸銨溶液 洗脫方式：梯度洗脫，見表 1 

表 1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

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