簡介： 生物體的激酶組是其基因組中的一組蛋白質(zhì)激酶，這些蛋白修飾酶是很多ZL領(lǐng)域的潛在靶標 近年來關(guān)于表征人類激酶組的研究和對可用激酶晶體結(jié)構(gòu)的探索導(dǎo)致對激酶作為藥物干預(yù)潛在靶標的關(guān)注日益增加 自從制藥行業(yè)在 20 世紀 80 年代末開始關(guān)注激酶起，研發(fā)的大多數(shù)激酶YZ劑都以酶的ATP 結(jié)合位點為靶標 然而，Gleevec? 的研發(fā)為此領(lǐng)域的研究注入了新的活力，該藥物是一種酪氨酸激酶YZ劑，可誘導(dǎo)靶標 BCR-Abl 激酶發(fā)生結(jié)構(gòu)重組 這引發(fā)了關(guān)于處理激酶YZ的創(chuàng)新理念，包括在 ATP 位點外部結(jié)合和嘗試防止激酶活化 詳細的酶動力學(xué)研究在基于新穎理念表征化合物作用機制中起著不可或缺的作用 一種具有極高價值的方法是等溫滴定量熱法 (ITC)，該方法可提供化合物與靶蛋白結(jié)合的完整熱力學(xué)資料 使用該方法產(chǎn)生的數(shù)據(jù)可對比化合物與不同形式的酶結(jié)合的親和力測定，例如游離酶酶-底物復(fù)合物酶-產(chǎn)物復(fù)合物活性和非活性酶 酶信號傳導(dǎo)YZ在腫瘤和炎癥領(lǐng)域是久經(jīng)考驗的疾病ZL方法 我們已經(jīng)知道，ITC 可提供信息確定其他配體是否對酶的生物活性有影響，因此本應(yīng)用報告主要闡述了 ITC 如何應(yīng)用于鑒定可賦予這一生物活性的酶的分子間復(fù)合物 ITC 概述： 等溫滴定量熱法可在一次實驗中測定結(jié)合作用的很多個特性，包括親和力 (KD)配體結(jié)合位點的數(shù)量 (n) 以及結(jié)合反應(yīng)的焓 (H) 該方法速度很快，不需要熒光標記，且可用于研究沒有催化活性的蛋白質(zhì)（這些蛋白質(zhì)因催化活性的缺失而被排除在酶動力學(xué)分析的研究之外） ITC 實驗通常涉及在恒定溫度下對靶蛋白滴定實驗化合物，使用 ITC 儀器測定結(jié)合活動期間釋放或吸收的熱量 在針對蛋白激酶的藥物研發(fā)期間可以多種途徑使用此方法 其中包括： 1.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)表征和制備，不僅僅是模型配體正確的親和力方面，還包括正確的化學(xué)計量，從而幫助評估功能蛋白質(zhì)的量，而無需催化活性 2.分析評價 3.鑒定可賦予生物活性的分子間復(fù)合物，ITC 可提供信息來確定其他配體是否會對試驗化合物的生物活性產(chǎn)生影響，這正是本應(yīng)用報告關(guān)注的焦點 馬爾文微量熱等溫滴定量熱儀MicroCal iTC200