引言

在基因治療與尖端科研領(lǐng)域，高質(zhì)量DNA長鏈的需求持續(xù)攀升。每一段精準(zhǔn)合成的基因序列，都可能承載著治愈疾病的希望，或是開啟科學(xué)新發(fā)現(xiàn)的鑰匙。然而，當(dāng)合成進(jìn)入50-100nt關(guān)鍵區(qū)間，“合成純度”與“合成長度”便難以兼得：

• 序列超過70nt后，全鏈合成效率往往急劇下降。
  

• 目標(biāo)產(chǎn)物中缺失序列比例升高，導(dǎo)致HPLC純度遠(yuǎn)低于使用要求。

這直接制約了長鏈DNA序列、復(fù)雜引物及基因元件等的制備效率與可靠性。

直面此瓶頸，英賽斯致力于探索長鏈核酸序列合成工藝，在實(shí)現(xiàn)高合成效率與高純度的同時提供長鏈核酸合成解決方案及實(shí)驗(yàn)設(shè)備。

本案例通過分段耦合工藝，系統(tǒng)在1–30nt階段采用兩次耦合，30–100nt階段為三次耦合，有效保障長鏈合成的完整性與效率，實(shí)現(xiàn)單步偶聯(lián)效率高達(dá)99.3%。配合英賽斯Hicient L-2000 Bio HPLC純度檢測，全程把控合成質(zhì)量，確保產(chǎn)物純度可靠。

設(shè)備：NestoOligo MC-16 核酸合成儀

合成工藝參數(shù)設(shè)置如表1

表1：NestoOligo MC-16核酸合成儀合成長鏈工藝參數(shù)表

注：長鏈采取分段合成，Coupling時1-30nt兩次耦合、30-100nt三次耦合

NestoOligo MC-16 核酸合成儀軟件頁面

序列1: 50nt-英賽斯HPLC Hicient L-2000 Bio檢測結(jié)果

序列1目標(biāo)分子量：MW:15503.1（檢測結(jié)果正確）

序列2: 100nt-英賽斯HPLC Hicient L-2000 Bio檢測結(jié)果

序列2目標(biāo)分子量：MW:30824（檢測結(jié)果正確）

工藝優(yōu)化后，50nt、100nt合成粗品純度分別為72.21%、54.52%，單步偶聯(lián)效率為99.3%，合成效果優(yōu)異。顯示了NestoOligo MC-16系統(tǒng)優(yōu)秀的合成效率和穩(wěn)定性，以及軟件對于方法優(yōu)化的便捷性。

英賽斯多通道核酸合成儀是一種能夠自動合成核酸分子的儀器，可以同時進(jìn)行16個核酸合成反應(yīng)，單通道合成規(guī)模覆蓋10nmol-20umol，從而大大提高了合成效率和產(chǎn)量。該儀器在多個領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用，在基因工程領(lǐng)域，可用于合成基因片段、構(gòu)建基因表達(dá)載體等；在分子生物學(xué)領(lǐng)域，可用于PCR擴(kuò)增、基因克隆、測序等過程中的核酸模板合成；在藥物研發(fā)領(lǐng)域，可用于合成藥物靶標(biāo)基因、藥物篩選中的探針分子等。NestoOligo MC-16 具備12堿基單體入口，一套設(shè)備即可滿足多樣化科研和早期藥物篩選的定制合成需求，讓合成效率全面升級。