雙特異性抗體是含有2種特異性抗原結合位點的人工抗體，能在靶細胞和功能分子（細胞）之間架起橋梁，激發(fā)具有導向性的免疫反應，是基因工程抗體的一種，現(xiàn)已成為抗體工程領域的熱點，在腫瘤的免疫治 療中具有廣闊的應用前景。

雙特異性抗體藥物具有濃度低及藥效顯著的特點，傳統(tǒng)紫外-可見分光光度法只能準確檢測A280nm，在0.3～0.7范圍的蛋白濃度，無法準確測定低濃度蛋白樣品。

本次分享的應用中，作者采用了TSKgel G3000SWXL凝膠色譜柱建立了測定低濃度雙特異性抗體藥物濃度方法[1]，該方法同時也適合于中、高濃度藥物濃度檢測。

分析條件  

色譜柱：TSKgel G3000SWXL (7.8 mmI.D.×30 cm, 5μm)

流動相：0.1 M磷酸氫二鈉+0.1 M硫酸鈉（磷酸調節(jié)pH到6.7）

流速：0.8 mL/min

進樣體積：100 μL

柱溫：25℃

檢測器參數(shù)：UV@214 nm

分析結果  

圖1  (A)流動相、(B)氯化鈉注射液、(C)制劑緩沖液、(D)0.01 mg/mL對照品及(E)系統(tǒng)殘留色譜圖疊加

圖2 峰面積與濃度線性關系圖

結果與討論 

采用TSKgel G3000SWXL建立的雙特異性抗體濃度測定方法， 分離譜圖見圖1，在對照品出峰時間處無可見干擾峰，表明方法專屬性良好。圖2是線性考察結果，在濃度范圍0.01～0.32 mg/mL范圍內，峰面積與樣品濃度，線性關系良好 (R2=1.00)，平均回收率在90.0%～110.0%之間，表明該方法準確度良好。

該方法使用的流動相無有機溶劑，屬于非變性色譜流動相條件，可保證抗體藥物分子不會發(fā)生變性，相對反相色譜方法更有優(yōu)勢。方法操作簡單、快速，為抗體藥物的有效性和安全性評價提供了可靠的濃度檢測方法。

參考資料：

1. 廉開禮;崔巖;彭偉;曹宇;劉忠;張貴民,趙麗麗，分子體積排阻高效液相色譜法測定低濃度重組人源化抗BCMA/CD3雙特異性抗體藥物的濃度. 藥物分析雜志. 2020,40(8): 1365-1370