促胰島素分泌肽（Exendin-4）是一種來源于美洲希拉毒蜥唾液中的含39個氨基酸的多肽，其作用機(jī)制與GLP-1類似，能夠促進(jìn)胰島素的分泌、增加胰島素敏感性、改善胰島細(xì)胞功能。

促胰島素分泌肽融合蛋白（Exendin-4-Fc fusion protein, 簡稱E4F4）是將Exendin-4與人IgG的Fc片段相連重新構(gòu)建的結(jié)構(gòu)蛋白，可在不影響藥效的同時延長了藥物的體內(nèi)半衰期，有效改善Exendin-4 在機(jī)體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)特性。

本次分享的應(yīng)用，作者采用了TSKgel G2000SWXL凝膠色譜柱建立了測定E4F4藥物純度的方法，經(jīng)驗證該方法適合E4F4純度檢測。

1. 分析條件  

色譜柱: G2000SWXL (7.8 mmI.D.×30 cm, 5 μm)

流動相: 20 mMPBS（pH 6.8)

流速: 0.5 mL/min

進(jìn)樣體積: 50 μL

柱溫: 20℃

檢測器參數(shù): UV@280 nm

2. 分析結(jié)果  

圖1  系統(tǒng)適用性色譜圖

圖2  專屬性實驗色譜圖

3. 結(jié)果與討論  

采用TSKgel G2000SWXL色譜柱建立了促胰島素分泌肽融合蛋白純度測定方法，分離譜圖見圖1，空白溶劑在積分范圍內(nèi)無吸收峰出現(xiàn)，E4F4主峰的理論塔板數(shù)為4238 (>3000) ，對稱因子為1.44 (>1.3)。

采用相對分子質(zhì)量為60000的ATIII和相對分子質(zhì)量為21000的 rh-CNTF為陰性對照，采集E4F4樣品以及E4F4、ATIII、rh-CNTF混合樣品的色譜圖 (見圖2) ，經(jīng)計算，ATIII與E4F4分離度為 0.89，rh-CNTF與E4F4分離度均為4.32，3種樣品分離度良好。

精密度測試結(jié)果，目標(biāo)峰面積RSD為0.49% (n=6)，保留時間RSD為0.11% (n=6)，純度RSD為0.01% (n=6)。以上結(jié)果說明該方法適合E4F4純度檢測。