咸鴨蛋黃中蘇丹紅的檢測—GX液相色譜法

端午將至，粽子、咸鴨蛋正，大家購買時要當(dāng)心蘇丹紅染色的有毒“紅心”咸鴨蛋。 “紅心”鴨蛋因營養(yǎng)價值高大受歡迎，一些不法商販就動了歪腦筋，通過給飼料里添加工業(yè)染料蘇丹紅四號，得到鮮紅的“紅心”咸鴨蛋，極大地危害了消費(fèi)者的健康。

蘇丹紅：人工合成的系列偶氮類工業(yè)染料，分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號。國際癌癥研究機(jī)構(gòu)將蘇丹紅Ⅳ號列為三類致癌物，其初級代謝產(chǎn)物鄰氨基偶氮甲苯和鄰甲基苯胺均列為二類致癌物，均有一定的潛在致癌作用。

近年來歐盟和我國都嚴(yán)禁使用蘇丹紅作為食品添加劑，參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 19681-2005《食品中蘇丹紅染料的檢測方法 GX液相色譜法》，我們采用反相GX液相色譜儀對蘇丹紅I號、II號和IV號進(jìn)行了測定。

1、 方法原理    

樣品經(jīng)溶劑提取、固相萃取凈化后，用反相GX液相色譜—紫外可見光檢測器進(jìn)行色譜分析，采用外標(biāo)法定量。 

2、 主要儀器和試劑

1）【上分】牌GX液相色譜儀，二元高壓梯度；

2）電子天平；

3）超聲波水??；

4）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，5）離心機(jī)，6）蘇丹紅檢測專用固相萃取柱；

6）蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取適量蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用乙腈配制成10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液待用。 

3、 實(shí)驗(yàn)方法

3.1樣品制備

3.1.1樣品提取準(zhǔn)確稱取咸鴨蛋黃1.0g于三角瓶中，加入10mL正己烷，渦旋1min后振蕩5min，超聲5min，4000r/min離心5min，收集上清液。下層殘留物用10mL正己烷按上述步驟重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，再加入5 mL正己烷混勻，待用。

3.1.2 SPE柱凈化：

1）活化：蘇丹紅檢測柱使用前用10 mL正己烷活化；

2）上樣和洗脫：蘇丹紅檢測柱上加入待凈化液，棄去流出液；依次加入5 mL正己烷、5 mL 1%乙酸乙酯正己烷淋洗，棄去淋洗液；再加入10 mL 30%乙酸乙酯-正己烷溶液，收集洗脫液。（整個上樣洗脫過程均保持流速1 mL/min)

3）洗脫液在40 ℃下減壓蒸餾近干，加1mL 40%甲基叔丁基醚甲醇溶液定容，過0.45μm 濾膜后供HPLC分析。 

3.2、GX液相色譜儀參考條件

色譜柱：C18 4.6 mm(i.d)×250mm，5μm；

梯度程序：流動相A: 乙腈       流動相B: 0.2%磷酸水溶液

流速：1 mL/min；

柱溫：40℃波長：518 nm；

進(jìn)樣體積:  20 μL

測定：取相同體積試樣制備液和標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入GX液相色譜儀，根據(jù)保留時間按定性，外標(biāo)峰面積法定量。

 4、  實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1  GX液相色譜圖

2.5 μg/mL 蘇丹紅I、蘇丹紅II、蘇丹紅IV混合標(biāo)準(zhǔn)樣品

                                                                      1、蘇丹紅I     2、蘇丹紅II      3、蘇丹紅IV

4.2工作曲線的繪制

蘇丹紅I號工作曲線見下圖，線性相關(guān)系數(shù)：0.9997

蘇丹紅II號工作曲線見下圖，線性相關(guān)系數(shù)：0.9999 

蘇丹紅IV號工作曲線見下圖，線性相關(guān)系數(shù)：0.9998 

5、  小結(jié)

實(shí)驗(yàn)中前處理步驟選用專用的蘇丹紅萃取小柱，去油效果佳，能有效去除油酯等干擾，有較高的回收率和穩(wěn)定性；采用二元高壓梯度，三種蘇丹紅組分有很好的分離效果和重復(fù)性。此方法也適用于其他食品基質(zhì)中蘇丹紅的檢測。