防曬油是為了保護(hù)人體皮膚免受UVA(波長(zhǎng)320~400 nm)和UVB(波長(zhǎng)275~320 nm)的輻射損害然而早在1997年的研究結(jié)果[1]即顯示,一些產(chǎn)品配方中所添加的UV防曬劑當(dāng)暴露于陽(yáng)光中會(huì)發(fā)生成分降解,存在潛在危害但有關(guān)這些降解產(chǎn)物的毒理學(xué)相關(guān)研究迄今未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)本文所介紹的方法結(jié)合了色譜分離與生物活性檢測(cè)技術(shù),能夠確定防曬霜產(chǎn)品中光降解產(chǎn)物的具有專(zhuān)屬性的生物活性
HPTLC-生物自發(fā)光聯(lián)用技術(shù)系將物理及化學(xué)的分離技術(shù)與采用發(fā)光細(xì)菌費(fèi)氏弧菌(Vibrio fischeri)的生物檢測(cè)方法將融合的專(zhuān)屬性分析技術(shù)生物發(fā)光YZ劑可對(duì)細(xì)菌的新陳代謝造成干擾,其YZ活性的等級(jí)與其化合物毒性呈正相關(guān)Vibrio fischeri細(xì)菌自1979年起就用于生態(tài)毒理學(xué)分析,特別是水樣測(cè)試(德國(guó)國(guó)標(biāo)DIN 38412 L34 比色法)以及化學(xué)品測(cè)試為了將細(xì)菌作為一種HPTLCGX薄層色譜的衍生化顯色手段,需要借助Bioluminex特種試劑盒(www.chromadex.com)
瑞士巴賽爾一史達(dá)特州立實(shí)驗(yàn)室是該州對(duì)于食品玩具和化妝品等各類(lèi)生活用品質(zhì)量進(jìn)行法規(guī)監(jiān)管的權(quán)力機(jī)構(gòu)作為非食品部門(mén)主任的Dr. Christopher Hohl,著力于分析日用消費(fèi)品中的各種添加物,如保鮮劑染料色素和紫外防曬劑(UV filters)等其工作還包括針對(duì)各類(lèi)有害的目標(biāo)化合物開(kāi)發(fā)適合的GC,HPLC以及HPTLC分析方法Z近引進(jìn)的基于HPTLC-生物自發(fā)光技術(shù)的毒理學(xué)檢測(cè)技術(shù)幫助該部門(mén)在篩查未知化合物時(shí)發(fā)現(xiàn)了數(shù)個(gè)感興趣的具有特殊毒性的色譜成分
與傳統(tǒng)的檢測(cè)手段相比,生物檢測(cè)顯示了與眾不同的結(jié)果:一些在色譜中具有高UV響應(yīng)值的成分斑點(diǎn)并未觀察到生物發(fā)光的改變,而另一些斑點(diǎn)在生物自顯影圖譜中則得到了很強(qiáng)的表達(dá),另外也有一些成分在2種圖譜中擁有基本一致的信號(hào)強(qiáng)度非常有趣的一點(diǎn)是,UV防曬劑的生物活性強(qiáng)度與其分子量具有負(fù)相關(guān)性在1998年后推出的所有新的UV防曬劑類(lèi)型(分子量均大于400),對(duì)Vibrio fischeri基本顯示YZ效應(yīng)
為了比較HPTLC和HPLC方法以及鑒別降解產(chǎn)物,防曬霜提取物在HPTLC薄層板上展開(kāi)后,將感興趣的活性成分斑點(diǎn)從板上刮下并采用HPLC-DAD和LC-MS進(jìn)行分析該鑒別流程結(jié)果滿意,由于HPTLC的塔板個(gè)數(shù)低于HPLC,因此薄層板上的某些個(gè)活性斑點(diǎn)在HPLC系統(tǒng)中被分開(kāi)為幾個(gè)色譜峰生物發(fā)光檢測(cè)下成分的峰高與傳統(tǒng)檢測(cè)方式(HPTLC-UV,HPLC-DAD和LC-MS)下的響應(yīng)不呈線性關(guān)系甚至有一個(gè)高活性成分采用各種物理-化學(xué)方法都無(wú)法得到檢測(cè)
Vibrio fischeri生物活性檢測(cè)可用于2個(gè)目的:一是它獨(dú)特的選擇性檢測(cè)機(jī)制使其可以探測(cè)到過(guò)去無(wú)法發(fā)現(xiàn)的化合物第二,細(xì)菌YZ作用作為一種活性指標(biāo)可以幫助甄別出哪些光降解產(chǎn)物需要進(jìn)行更進(jìn)一步的毒理學(xué)評(píng)估 生物發(fā)光檢測(cè)儀
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