一、樣品提取 

準(zhǔn)確稱取魚肉樣品 5.0 g 于 50 mL 離心管 1 中，加入 1.5 mL  20% 的鹽酸羥胺，2.5 mL 1.0 mol/L 的對甲苯磺酸，5.0 mL 乙 酸鈉 - 對甲苯磺酸緩沖液（4.95 g 無水乙酸鈉及 0.95 g 對甲 苯磺酸，用乙酸調(diào) pH=4.5，定容至 1 L），勻漿機(jī)均質(zhì) 30 s（10000  r/min）。加入 10 mL 乙腈，劇烈振搖 30 s。加入 5 g 酸性氧 化鋁，震蕩 30 s。離心機(jī)離心 10 min（3000 r/min）, 取上清 液轉(zhuǎn)移至預(yù)先加好 10 mL 水、2 mL 二甘醇的離心管 2 中。加 入 10 mL 乙腈至離心管 1 中，重復(fù)上述提取一次，合并乙腈層。 離心管 2中加入 15 mL二氯甲烷，振蕩 10 s，離心 10 min（3000  r/min），取二氯甲烷層于梨形瓶中。繼續(xù)用 5 mL 乙腈、10  mL 二氯甲烷重復(fù)上述提取一次，合并兩次提取的二氯甲烷層。 將提取液 45℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至 1 mL，再用 2.5 mL乙腈溶解，待凈化。 

二、SPE 柱凈化（Copure? ALA，1000 mg/3 mL；Copure?  PRS，500 mg/3 mL） 

活化：按照 ALA 柱在上，PRS 柱在下順序?qū)芍?lián)，固相萃取柱使用前使用 5 mL 乙腈活化。 

上樣和洗脫：將梨形瓶中的待凈化液轉(zhuǎn)移至 ALA 柱中凈化， 梨形瓶使用 5 mL 的乙腈分兩次洗，棄去 ALA 柱，吹 PRS 柱 至近干，在不抽真空的情況下，加入 5 mL　5% 氨水乙腈溶 液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。 

重新溶解：洗脫液 45℃氮吹至近干，用 1 mL 乙腈定容， 過 0.45 μm 濾膜，待上機(jī)測試。 

三、儀器條件 

設(shè)備：Waters Alliance 2695 色譜柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) 檢測器：Waters 2487 紫外檢測器 檢測波長：618 nm 流動相：A：乙腈   B：0.05 mol/L 乙酸銨緩沖溶液 洗脫方式：梯度洗脫 見表 1 

表 1 梯度洗脫條件