．薄膜準備：將薄膜切成2×8cm（或2.5×7cm）的小片，在薄膜的無光澤面一端1.5cm處用鉛筆輕輕劃一橫線，表示點樣位置，將薄膜浸入緩沖液中充分浸透（浸泡5~10分鐘或預先浸泡好，隨時取用）后取出，夾于濾紙中，吸去多余的溶液 2．點樣：用血清加樣器于無光澤面點樣（微量吸管或玻片），沾取血清后垂直輕輕接觸加樣處，讓血清吸入膜內，再拿開加樣器 3．平衡：待血清滲入薄膜，將薄膜無光澤面向下，兩端平貼在鋪有濾紙或紗布的電泳槽支持板上（加血清的一端貼在電泳槽陰極端）加蓋，靜置10分鐘，使薄膜中的液體獲得平衡 4．電泳： 電壓：約110~140V（或相當于電場強度10V/cm） 電流：0.4~0.6mA/cm寬 時間：45~60分鐘 5．染色：電泳停止，關閉電源，將薄膜從電泳槽中取出，直接浸入氨基黑染色液中，染色3~5分鐘，從染色液中取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗脫色數(shù)次，至薄膜背景完全無色為止，取出薄膜用濾紙吸干 6．定量：將漂洗后的薄膜夾于濾紙中吸干，剪下各蛋白區(qū)帶，分別置于試管中，另于空白區(qū)剪一平均大小的薄膜放入空白管中，清蛋白管中加0.4MNaOH4ml,其余各加5ml，反復振搖使其充分洗脫，放30分鐘后比色（波長650nm），以空白管調光密度到0點，讀記各蛋白質的光密度值 光密度總和（T）=2A 1 2 A清蛋白%=（2A/T）×1**% 1球蛋白%=（1/T）×1**% 2球蛋白%=（2/T）×1**% 球蛋白%=（/T）×1**% 球蛋白%=（/T）×1**% 7.透明保存：將染色漂洗后晾干的薄膜條浸入新鮮配制的透明液中經2~3分鐘，貼在玻璃板上，干后即成透明薄膜，可保存或用吸光度計直接測定各區(qū)帶的吸光度 注：容易產生的幾種現(xiàn)象