【概述】

針對二甲雙胍中的基因毒性雜質N-亞硝基二甲胺，基于賽默飛液相色譜串聯(lián)三重四極桿質譜TSQ Fortis建立了穩(wěn)定靈敏的分析方法。該方法使用大氣壓化學電離源（APCI）進行有效檢測分析，在適宜的濃度范圍內線性關系良好（r2>0.99）。2ng/mL濃度水平重復性試驗結果優(yōu)異。該方法穩(wěn)定快速，靈敏度能滿足二甲雙胍中微量基因毒性物質N-亞硝基二甲胺的日常分析要求。

【實驗/設備條件】

1.3 色譜條件

本實驗中采用Thermo Scientic Hypersil GOLD Phenyl HPLC分析柱，高載量，峰型好，對NDMA有較好的保留，和API可以做到有效分離。該分析柱基于高純硅膠設計，用于解決諸多色譜難題，包含C4連接基團，具備中等疏水性，與芳香族化合物具有加強的 pi-pi 相互作用，具有出眾的峰形和靈敏度，特別適合苯環(huán)和芳環(huán)化合物的分析，對芳環(huán)分析物具有出眾的保留能力和獨特的選擇性。

1.4 質譜條件

本實驗采用全新一代Thermo Scientic TSQ Fortis三重四極桿質譜儀，該質譜儀具備ZY的耐用性，通過主動離子管控技術（AIM+）和基質分離離子引導（MSIG）保持離子路徑清潔，確保系統(tǒng)更長時間正常運行；配合多款液相色譜實現(xiàn)日常高通量定量分析。

【樣品提取】

1.2 樣品前處理

1.2.1 NDMA標準品儲備液

N-亞硝基二甲胺標準品，純度98.5%

用超純水配置NDMA標準品溶液，并用水稀釋至100 ng/mL作為標準品儲備液

1.2.2 靈敏度溶液

精密量取對照品溶液適量，定量稀釋制成每1mL中含1ng的溶液。

1.2.3供試品溶液制備

取本品藥片（或膠囊）細粉適量，精密稱定，至50 mL離心管中，精密加入甲醇10mL，渦旋混勻1 min，震蕩20 min，

以4500轉/分的速率離心10分鐘，取上清液濾過，取續(xù)濾液即得。

【實驗/操作方法】

線性范圍及系統(tǒng)適應性測試

配制濃度為1、2、5、10、50、100 ng/mL的標準溶液，采用上述儀器條件進行檢測，所得標準曲線線性關系良好，相關系數(shù)R2 大于0.99。按照FDA法規(guī)進樣順序要求，序列中初始6針標準品溶液（2 ng/mL）相對標準偏差為6.01%，整個序列中標準品溶液偏差小于5%。原料藥樣品中NDMA的保留時間與標準品偏差小于2%，經(jīng)測定原料藥樣品中NDMA的濃度為1.8 ng/mL。

【實驗結果/結論】

本文建立了基于三重四極桿質譜TSQ Fortis檢測二甲雙胍中基因毒性雜質N-亞硝基二甲胺（NDMA）的方法，該方法的靈敏度及重現(xiàn)性完全可以滿足FDA要求；實際樣品檢測時NDMA可與主成分有效分離，保證結果準確性。同時，針對制藥行業(yè)儀器控制及數(shù)據(jù)處理軟件合規(guī)性要求，所有數(shù)據(jù)完全采用符合法規(guī)要求的Chromeleon軟件進行處理，從而可為用戶提供NDMA檢測的完整解決方案。

【儀器/耗材清單】

1.1 儀器與試劑

1.1.1 Thermo Fisher Vanquish Binary Flex液相色譜儀1.1.2

Thermo Fisher TSQ Fortis三重四極桿質譜儀

1.1.3 Thermo Scientific Hypersil GOLD Phenyl色譜柱（P/

N：25903-104630）

1.1.4 甲醇，LCMS級（Fisher A456-4）

1.1.5 乙腈，LCMS級（Fisher A955-4）

1.1.6 水，LCMS級（Fisher W6-4）

1.1.7 甲酸，LCMS級（Fisher A117-50）

1.1.8 Titan3, 17mmPVDF過濾器，0.22um（P/N：42213-PV）