【概述】

依據(jù)國標GB T32098-2015對生物發(fā)酵法中有機酸的分類，單羧酸和二元羧酸在發(fā)酵食品中普遍存在。本文采用賽默飛

全新液相色譜Vanquish Core平臺以及復(fù)合模式色譜柱對發(fā)酵食品中4種單羧酸進行分離，流動相中未添加離子對試劑，

也沒有使用高水相體系，配合Acclaim Mixed-Mode WAX-1色譜柱，提高了4種有機酸的分離和保留。4種有機酸在其適宜的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（10-1000g/mL，r-2=0.9999），LOD在1.1~1.4μg/mL之間，LOQ在4~5μg/mL之間，均能滿足發(fā)酵食品中單羧酸的檢測要求。

【實驗/設(shè)備條件】

2.1.3 乙腈（色譜純，美國Thermo Fisher公司）；實驗用水為Milli-Q去離子水；磷酸二氫鉀（美國Thermo Fisher公司

Arcos品牌，色譜純，99%） 磷酸（國藥集團，分析純）

2.1.4 測SY標準品：甲酸（LCMS純，美國Thermo Fisher公司）乙酸（LCMS純，美國Thermo Fisher公司）；乳酸（

食品級，95%，客戶提供），丁酸（色譜級，客戶提供）

2.3 色譜條件

色譜柱：Thermo Acclaim Mixed-Mode WAX-1（250mm×4.6mm，5m）

柱溫：30 ℃；

進樣量：10 μL；

流速：0.8ml/min；

檢測波長：UV210nm；

流動相：乙腈：25mmol磷酸二氫鉀（磷酸調(diào)PH3.93）（40:60），等度洗脫。

【樣品提取】

2.2.2 儲備液：分別精確稱取四種有機酸適量，水溶解，配制儲備液 1000 μg/mL。

2.2.3 系列標準曲線：水溶劑，配制系列標準溶液10μg/mL– 1000μg/mL

2.2.4 供試品：精密稱取酸奶1.2g，加8mL水，振搖1min，定容到10mL，4500r/m離心10min，過濾，取續(xù)濾液作為上機溶液。精密稱取固體酵素1g，加8mL水，振搖1min，定容到10mL，4500r/m離心10min，過濾，取續(xù)濾液作為上機溶液。

【實驗/操作方法】

3.1 重復(fù)性測試

采用上述儀器分析方法，4種單羧酸在20分鐘內(nèi)均可獲得良好的色譜峰，分離效果良好。圖1為四種有機酸200ppm濃度色譜圖，各峰面積及保留時間RSD%值均小于0.6%，其中各化合物測試結(jié)果見表2。

3.2 線性范圍測試

采用上述儀器分析方法，對4種有機酸進行線性范圍測試，線性相關(guān)系數(shù)r2均大于0.999，線性關(guān)系良好。4種有機酸線性范圍、線性相關(guān)系數(shù)、LOD（S/N>3）及LOQ（S/N>10)結(jié)果見表2，化合物線性方程圖見圖2。

3.3 樣品測試

對市售的發(fā)酵酸奶和固體酵素飲料進行有機酸檢測，乳酸均檢出，其他干擾物與乳酸及其他幾種有機酸位置互不影響。

【實驗結(jié)果/結(jié)論】

Acclaim Mixed-Mode WAX-1色譜柱獨特的復(fù)合模式鍵合相，同時兼具反相和弱陰離子交換兩種交換模式，此方法報告中4種有機酸主要通過離子交換模式進行保留，相比C18而言，具有不需要高水相，不需要添加離子對試劑的優(yōu)勢。方法重復(fù)性良好，4種有機酸在10-1000ppm范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，高濃度有機酸峰形尖銳對稱。本方法非常適合用于發(fā)酵食品中單羧酸的檢測。

【儀器/耗材清單】

2.1 儀器與試劑

2.1.1 Thermo Fisher Vanquish Core液相色譜儀

2.1.2 Thermo Acclaim Mixed-Mode WAX-1（250mm×4.6mm，5m）部件號：064985