一、樣品提取 

稱(chēng)取混勻蜂蜜試樣 5.00 g( 精確到 0.01 g)，置于 50 mL 離心 管中，用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 緩沖液溶解并定容至 50  mL，渦旋混合 1 min，冰水浴超聲 10 min，轉(zhuǎn)移至 50 mL 離心 管中，冷卻至 0℃ -4℃，5000 r/min 離心 10 min( 溫度低于 15℃ )，用濾紙過(guò)濾待凈化。 

二、SPE 柱凈化（Copure? HLB，60 mg/3 mL） 

活化：HLB 柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。 

上樣和洗脫：準(zhǔn)確吸取 10 mL 備用液以 1 滴 / 秒的速度過(guò) HLB 固相萃取柱，待樣液全部流出后，依次用 5 mL 水和 5 mL 甲醇 - 水 (5:95, v/v) 淋洗，棄去全部流出液。2.0 kPa 以 下減壓抽干 5 min，Z后用 10 mL 甲醇 - 乙酸乙酯溶液 (1:9,  v/v) 洗脫，收集洗脫液。

重新溶解：洗脫液于 40℃氮?dú)獯蹈?，?10 mmol/L 三氟乙酸 水溶液 1.0 mL 溶解殘余物，水系濾膜過(guò)濾，供高效液相色譜 測(cè)定。 

三、儀器條件 

設(shè)備：Waters Alliance 2695 色譜柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) 檢測(cè)器：Waters 2487 紫外檢測(cè)器 檢測(cè)波長(zhǎng)：350 nm 流動(dòng)相：A：乙腈   B：10 mmol/L 三氟乙酸水溶液 洗脫方式：梯度洗脫，見(jiàn)表 1 

表 1 流動(dòng)相梯度洗脫程序