安 眠酮（methaqualone）又稱甲苯喹啉酮，系喹唑酮類衍生物，有鎮(zhèn)靜和催眠作用，在臨床上常用作催眠劑、鎮(zhèn)靜劑。在動物運輸過程中使用可減少動物的應(yīng)激反應(yīng)，降低動物的死亡率。安 眠酮作為可能會在水產(chǎn)動物運輸過程中違規(guī)使用的禁用藥物，為保障水產(chǎn)品質(zhì)量安全，我國和歐盟均規(guī)定在動物食品中不得檢出。

安譜實驗根據(jù)2021年新國標GB 31656.5-2021《食品安全國家標準 水產(chǎn)品中安 眠酮殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，對魚肉和蝦肉進行測試，此方法回收率高，精密度好。

一、標準溶液配制

用50%甲醇水溶液配制成安 眠酮濃度分別為0.4、1、5、25、100 ng/mL，安 眠酮-D7濃度均為4 ng/mL的系列標準工作液，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析，現(xiàn)配現(xiàn)用。以安 眠酮和安 眠酮-D7峰面積比值為縱坐標，安 眠酮濃度為橫坐標，繪制標準工作曲線，求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

二、提取

取攪碎后的試樣約5 g（準確至±0.05 g）于50 mL離心管中，加200 ng/mL安 眠酮-D7工作液50 μL、水3 mL，渦旋混合30 s，加正己烷15 mL，振蕩提取3 min，超聲5 min，4500 r/min離心7 min.取正己烷層至25 mL容量瓶，殘渣再加正己烷8 mL，重復(fù)提取一次，合并正己烷液，并用正己烷稀釋定容至刻度，混勻，備用。

三、凈化

小柱：CNWBOND Si硅膠 SPE小柱，貨號SBEQ-CA1353，規(guī)格500 mg/ 3mL

活化：5 mL丙酮

平衡：5 mL正己烷

上樣：10 mL備用液，速度每秒1滴

淋洗：5 mL 20%乙 醚-正己烷溶液，淋洗后抽干

洗脫：8 mL 50%乙 醚-正己烷溶液，洗脫后抽干

濃縮：收集洗脫液，40℃水浴氮氣吹干，加50%甲醇溶液1.0 mL溶解殘余物，經(jīng)0.22 μm水相聚醚砜針式濾器濾過，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

四、LC-MS/MS測定

液相色譜條件

色譜柱：CNW C18液相色譜柱（2.1*150 mm，5 μm）

流動相：A：0.1%甲酸水；B：甲醇，梯度洗脫條件見表1；

表1 梯度洗脫條件

流速：0.3 mL/min

柱溫：25℃

進樣量：10 uL

質(zhì)譜條件

離子源：ESI

掃描方式：正離子模式

檢測方式：MRM

反吹干燥氣：100

接口溫度：320℃

霧化氣：200

電離電壓：4500 V

離子源溫度：350℃

表2 母離子、子離子和碰撞參考質(zhì)譜條件

五、實驗譜圖

1、標品譜圖

2、魚肉基質(zhì)譜圖

圖2 魚肉基質(zhì)空白譜圖

圖3 魚肉基質(zhì)加標譜圖

3、蝦肉基質(zhì)譜圖

圖4 蝦肉基質(zhì)空白譜圖

圖5 蝦肉基質(zhì)加標譜圖

六、實驗數(shù)據(jù)

1、標準曲線

圖6 安 眠酮標準曲線

在0.4-100 ng/mL濃度范圍內(nèi)，內(nèi)標法繪制標準曲線：

表3 線性回歸方程

2、基質(zhì)結(jié)果

表4 基質(zhì)添加回收率和精密度

七、實驗結(jié)論

內(nèi)標法測試魚肉和蝦肉基質(zhì)中的安 眠酮，基質(zhì)中均未檢測到，在5 μg/kg的添加濃度水平下，回收率為100%~110%，相對平均偏差<1.5%。

八、注意事項

1.移液槍移取甲醇、正己烷有機試劑時，體積不準確，在標準溶液配制和移取10 mL待凈化液時需要采用合適的方式，比如氣密針、移液管。

2.提取時應(yīng)確保樣品在水中得到很好的分散，如渦旋不開，可用玻璃棒攪拌。

3.取正己烷層時，如出現(xiàn)較厚的中間層或乳化層，則將樣品重新震蕩3 min，8000 r/min離心5 min，再取出正己烷層。