前言

稀少糖是自然界中數(shù)量較少的糖，可以通過酶法生產(chǎn)。稀少糖通常用作低脂低卡食品中高熱量糖的替代品。此外，稀少糖被認(rèn)為可以減緩消化后血糖水平的升高，從而抑 制內(nèi)臟脂肪的積累。在商業(yè)食品中，這種稀少糖的使用越來越受歡迎。本文使用SCION LC6000高效液相色譜儀開發(fā)了一種親水作用液相色譜（HILIC）技術(shù)對L-核糖、D-阿洛酮糖、木糖醇、D-塔格糖、D-阿洛糖和L-葡萄糖進行檢測和完全分離的方法。HILIC是一種利用極性固定相和流動相（包含水和更少極性的溶劑，如乙腈）的一定比例的色譜技術(shù)。

實驗部分

01、儀器 

采用包含以下模塊的SCION（賽里安）LC6000高效液相色譜儀系統(tǒng)：

? 集成六通道真空脫氣的SCION LC6100四元泵

? SCION LC6210 高精度、低殘留自動進樣器

? SCION LC6310 立式柱溫箱

? SCION LC6460 RI示差檢測器

02、液相色譜條件

表1. 方法參數(shù)

試劑及標(biāo)準(zhǔn)品

標(biāo)準(zhǔn)品以水：乙腈（1:1）為溶劑稀釋，濃度范圍為0.01%至0.5%。優(yōu)化了三種不同的流動相組成，結(jié)果顯示流動相優(yōu)化對于稀少糖分離至關(guān)重要。

結(jié)果

01、示例圖譜 

流動相1（水/乙腈20:80）分析0.5%稀少糖校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)時獲得的色譜圖，見圖1。如圖1所示，當(dāng)流動相設(shè)置為20:80的水/乙腈時，木糖醇和D-塔格糖沒有分離，如峰3和4所示。

圖1. 0.5%稀少糖在（水/乙腈20:80）體系中的色譜圖

然后，使用（水/乙腈15:85）分析相同的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品（0.5%）。通過增加乙腈的濃度分離木糖醇和D-塔格糖，分析獲得的色譜圖見圖2。通過增加乙腈與水的比例，木糖醇和D-塔格糖的分離僅略有改善，但并未完全分離所有六種稀少糖。

圖2. 0.5%稀少糖在（水/乙腈15:85）體系中的色譜圖

進一步調(diào)整流動相，加入甲醇溶劑。Z 終組成為水/乙腈和甲醇，濃度分別為5:75:20%， 分析獲得的色譜圖見圖3。

圖3. 0.5%稀少糖在（水/乙腈/甲醇 5:75:20）體系中色譜圖

02、標(biāo)準(zhǔn)曲線 

流動相加入甲醇成功地分離了所有六個目標(biāo)化合物，對每個目標(biāo)分析物制作了校準(zhǔn)曲線，圖4顯示了稀少糖的校準(zhǔn)曲線。除了D-阿洛酮糖，所有其他目標(biāo)化合物的線性度均為0.9999，D-阿洛酮糖的R2值為0.9998。

圖4. 稀少標(biāo)準(zhǔn)曲線

03、樣品

為了檢驗該方法在真實樣品中的可行性，使用相同的方法（水/乙腈/甲醇 5:75:20）體系，分析了一種商業(yè)化稀少糖的糖漿，參考標(biāo)準(zhǔn)中還包括果糖和半乳糖。

將0.1g糖漿加入一個含有2.5mL超純水的試管中。攪拌溶解后加入2.5mL HPLC級別的乙腈。輕輕搖動后，將混合物通過0.45μm的膜過濾。然后將5μL的樣品注入LC6000高效液相色譜儀，分析獲得的色譜圖見圖5。通過比較上面兩個色譜圖，可以看出使用（水/乙腈/甲醇 5:75:20）體系可以成功地分離稀少糖。

圖5.糖漿色譜圖

結(jié)論

本文使用SCION（賽里安）L6000高效液相色譜儀開發(fā)了一種使用親水作用液相色譜的稀少糖分析方法，配置RI檢測器，在方法開發(fā)中，流動相優(yōu)化對于分離結(jié)果產(chǎn)生了不同的影響，通過調(diào)整溶劑比例展示了微小的流動相成分變化可以帶來顯著的分離改進，Z 終對于所有目標(biāo)化合物均得到了優(yōu)秀的線性和分離效果。