前言

維生素是生命正常代謝過程中至關(guān)重要的化合物。它們不僅天然存在于許多食品中，目前也經(jīng)常添加到加工食品中。此外，在飲食不規(guī)律的人群中，使用維生素補(bǔ)充劑已經(jīng)愈發(fā)常見。維生素分為兩種，即水溶性和脂溶性。其中水溶性維生素Z為常見主要是硫胺素（B1），吡哆素（B6），鈷胺素（B12），核黃素（B2），煙酸（B3），煙酰胺，抗壞血酸葡糖苷，維生素C 和異抗壞血酸。

由于水溶性維生素的性質(zhì)不穩(wěn)定，因此在常規(guī)分析中具有一定難度。日常生活中影響水溶性維生素穩(wěn)定性的因素有很多，如暴露在高溫、強(qiáng)光、空氣的條件下以及與其它的食品成分發(fā)生相互作用，均會影響水溶性維生素的穩(wěn)定性。

通過使用帶有二極管陣列檢測器（DAD）的反相高效液相色譜（HPLC），很容易開發(fā)出檢測水溶性維生素的方法。在定量分析中，由于維生素C和異抗壞血酸的不穩(wěn)定性，其在樣品制備過程中經(jīng)常發(fā)生分解，因此建議建立單獨(dú)的 HPLC 方法。

本應(yīng)用方案使用 賽里安/SCION 6000 HPLC（配 DAD 檢測器和 C18，5μm 反相柱）時(shí)，可以同時(shí)輕松鑒定 9 種目標(biāo)化合物。制備的分析用標(biāo)準(zhǔn)品在四丁基銨中的濃度范圍為 0.1-50mg / L。為了分析維生素 B1和 B6，使用了鹽酸鹽。同時(shí)因?yàn)闃悠肥歉缓S生素的健康飲料和營養(yǎng)補(bǔ)品，因此在樣品制備過程中以 1:10 的比例稀釋，然后通過 0.45μm 過濾器過濾后待分析 。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器和試劑

采用包含以下模塊的賽里安LC6000高效液相色譜儀系統(tǒng)：

? 集成六通道真空脫氣的SCION LC6000四元泵

? 賽里安 LC6000 高精度、低殘留自動進(jìn)樣器

? 賽里安 LC6000 柱溫箱

? 具有超高靈敏度的賽里安 LC6000 二極管陣列檢測器

液相色譜條件

表1  方法參數(shù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果

所有目標(biāo)化合物均具有良好的現(xiàn)性；R2值在 0.996 以上。在分析中，由于洗脫液中維生素的不穩(wěn)定性，為了保證良好的線性，維生素 C、異抗壞血酸和維生素 B12必須現(xiàn)用現(xiàn)配。圖 1 顯示了維生素 B6的線性，該線性代表了上述三種目標(biāo)化合物之外的所有目標(biāo)化合物（R2為 0.996）。

圖1  VB 6的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表 2 列出了每種目標(biāo)化合物以及圖 2 的相應(yīng)峰數(shù)。圖 2 顯示了 5mg / L 分 析標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。圖 2 突出顯示了每種目標(biāo)維生素的出色分離度和峰形。 

表2  峰標(biāo)識

圖2  5mg/L 標(biāo)準(zhǔn)樣品圖譜

圖 3 顯示了分析富含維生素的飲料樣品時(shí)獲得的色譜圖。此外，圖 4 突出顯示了 Compass CDS 軟件將目標(biāo)分析物的吸收光譜與分析標(biāo)準(zhǔn)品的光譜進(jìn)行比較的能力，從而提高了結(jié)果可信度。

圖3  富含維生素飲料的色譜圖

圖4  標(biāo)準(zhǔn)樣品和樣品測試結(jié)果光譜圖對比

圖 5 顯示了營養(yǎng)補(bǔ)品樣品的色譜圖，而圖 6 詳細(xì)顯示了維生素 C 與分析標(biāo)準(zhǔn)品的吸收光譜比較。營養(yǎng)補(bǔ)品比富含維生素的健康飲料多一種維生素，即維生素 C。兩個(gè)樣品中均含有維生素 B1 和煙酰胺。通過吸光度光譜的比較證實(shí)，鑒定出的目標(biāo)化合物具有與該化合物的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品完全相同的吸光度，因此結(jié)果準(zhǔn)確可信。

圖5  營養(yǎng)補(bǔ)品樣品的色譜圖

圖6  維生素C與分析標(biāo)準(zhǔn)品的吸收光譜比較

結(jié)論

本文使用帶有二極管陣列檢測器和反相 C18色譜柱的賽里安HPLC-6000系統(tǒng)可以輕松同時(shí)鑒定出 9 種水溶性維生素，方法簡便、快速。由于維生素C和異抗壞血酸的不穩(wěn)定特性，樣品制備是此應(yīng)用過程中必須考慮的關(guān)鍵因素。即使對于不穩(wěn)定的維生素，賽里安LC6000 也觀察到了極好的線性。同時(shí) Compass CDS 軟件可輕松比較吸收光譜，結(jié)果準(zhǔn)確可信。