前言

地西pan別名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，主要用于人和動(dòng)物鎮(zhèn)定催眠及癲癇的ZL。由于，地西pan添加到飼料中可以提高動(dòng)物的生長(zhǎng)速度和減少飼料用量，故部分養(yǎng)殖企業(yè)為謀取更多效益，在飼料中非法添加地西pan，我國(guó)農(nóng)業(yè)部與質(zhì)量監(jiān)察部門已經(jīng)嚴(yán)格禁止在飼料中添加地西pan。地西pan具有蓄毒性，在飼料中長(zhǎng)期添加，會(huì)導(dǎo)致其在肌肉組織中富集，從而進(jìn)一步危害消費(fèi)者健康，所以建立一種GX、快速的定量流程及檢測(cè)方法尤為重要。本文使用SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)對(duì)飼料中的地西pan進(jìn)行固相萃取富集，用GX液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。

本文參考《T/CFIAS003-2019 飼料中地西pan的測(cè)定GX液相色譜法》采用SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，測(cè)定地西pan的回收效果，實(shí)驗(yàn)證明，地西pan回收率在86.8%~99.4%之間，重現(xiàn)性RSD為5.9 %，回收率和重現(xiàn)性良好，說明SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)可靠、穩(wěn)定，適用于飼料中的地西pan樣品前處理。

1、實(shí)驗(yàn)過程

1.1儀器與試劑

SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)（萊伯泰科公司）；

LC600高壓GX液相色譜儀（萊伯泰科公司）；

地西pan，1000mg/L，壇墨質(zhì)檢；

甲醇（色譜純）；

甲酸（分析純）；

氨水（分析純）；

PCX混合型陽(yáng)離子交換柱，（60mg/3mL萊伯泰科）；

實(shí)驗(yàn)用水：超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配置

取1mL地西pan標(biāo)品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

取20μL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇定容到1mL，配制成2 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品制備

將飼料樣品打碎，稱取2.0g樣品，加入400μL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，使飼料中地西pan的加標(biāo)濃度為0.4mg/kg，加入20mL乙腈，渦旋5min，超聲20min，5000rad/min離心10min,取5mL上清液,待固相萃取處理。同時(shí)做樣品空白。

1.3.2 固相萃取及濃縮

按照?qǐng)D1所示的方法進(jìn)行SPE1000方法編輯，并加載方法到相應(yīng)通道，進(jìn)行樣品的固相萃取。收集洗脫液到收集瓶中，氮吹濃縮至1mL以下，甲醇定容至1mL，待測(cè)。

圖1   地西pan的SPE富集方法

1.3.3 HPLC測(cè)定水中地西pan

色譜柱：C18，5μm，4.6nm*150mm；

波    長(zhǎng)：230nm；

流    速：1.0mL/min ；

進(jìn)樣量：20μL；

流動(dòng)相：甲醇：水=65:35V/V

2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1  地西pan色譜圖

2.1.1地西pan標(biāo)品色譜圖

圖2為取100μL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，用甲醇：水（8:2）定容到1.0mL檢測(cè)（200μg/L），地西pan標(biāo)品出峰色譜圖，出峰時(shí)間為11.88min。

圖2  地西pan標(biāo)品出峰色譜圖

2.1.2飼料中地西pan加標(biāo)樣品色譜圖

圖3地西pan加標(biāo)樣品出峰色譜圖，出峰時(shí)間為11.90min。 

圖3  地西pan加標(biāo)樣品出峰色譜圖

2.1.3飼料中地西pan樣品色譜圖

圖4為空白樣品色譜圖。

圖4  空白樣品色譜圖

2.2 HPLC測(cè)定飼料中地西pan回收率

HPLC測(cè)定飼料中地西pan回收率計(jì)算結(jié)果如下表，萃取富集后的回收率在86.8% ~99.4% 之間，重現(xiàn)性RSD為5.9%。

表1  飼料中地西pan的加標(biāo)回收率（加標(biāo)量0.4mg/kg）

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

1、254nm和230nm的波長(zhǎng)均可檢測(cè)到地西pan，但地西pan在230nm波長(zhǎng)下，信號(hào)響應(yīng)ZG。

2、SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)凈化的樣品，其回收率和重現(xiàn)性良好，工作效率高，可應(yīng)用于此類樣品的前處理方法中。

4、參考標(biāo)準(zhǔn)

T/CFIAS003-2019飼料中地西pan的測(cè)定GX液相色譜法