一、樣品提取 

稱取 4.0 g 牛奶樣品，加 10 mL 甲醇渦旋 10 分鐘，4℃下 6000 轉(zhuǎn)冷凍離心 10 分鐘，取 2 mL 提取液加 40 mL PBS 溶液 稀釋待凈化。 

二、免疫親和柱凈化（Copure? 黃曲霉毒素 M1 免疫親 和柱，1 mL） 

上樣：將 20 mL 上樣器連接于免疫親和柱上端，取待凈化液以 1-2 滴 / 秒的速度通過免疫親和柱，棄掉流出的液體。 淋洗和洗脫：加 10 mL水淋洗柱子，棄掉流出的液體；抽干小柱； 加入 4 mL 乙腈分兩次緩慢洗脫，流速約為 2-3 秒 / 滴。 

重新溶解：在 40℃下氮吹至近干，加初始流動(dòng)相定容至 1  mL，過 0.22 μm 濾膜，待上機(jī)測試。 

三、儀器條件 

設(shè)備：島津 HPLC-30 A 色譜柱：Inertsil ODS-3 (2.1 mm×75 mm, 3 μm) 檢測器：RF-20A 熒光檢測器 檢測波長：激發(fā)波長：435 nm 發(fā)射波長：365 nm 流動(dòng)相：A：乙腈 B：水 洗脫方式：等度洗脫，A：B=25：75 流速：0.3 mL/min 進(jìn)樣體積：1 μL

 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

表 1 1.0 μg/kg 牛奶中黃曲霉毒素 M1 的添加回結(jié)果