維生素B12又叫鈷胺素，是一種含有3價鈷的多環(huán)系化合物，4個還原的吡咯環(huán)連在一起變成為1個咕啉大環(huán)（與卟啉相似），是weiyi含金屬元素的維生素。維生素B12為紅色結(jié)晶粉末，無嗅無味，微溶于水和乙醇，在pH值4.5～5.0弱酸條件下Z穩(wěn)定，強酸（pH<2）或堿性溶液中分解，遇熱可有一定程度破壞。

高等動植物不能制造維生素B12，自然界中的維生素B12都是微生物合成的。維生素B12是weiyi的一種需要一種腸道分泌物（內(nèi)源因子）幫助才能被吸收的維生素，參與制造紅細胞，防止惡性貧血，防止大腦神經(jīng)受到破壞。

GB 5009.285-2022 《食品安全國家標準食品中維生素B12的測定》，于2022年6月30日正式發(fā)布，2022年12月30日正式實施。新標準中新增加的兩個方法檢測要點、注意事項有哪些呢？

GB 5009.285-2022常見問題Q&A

Q：相比GB 5413.14-2010標準相比，GB 5009.285-2022有哪些變化呢？

解答：

1）檢測范圍的變化：GB 5413.14-2010只適用于嬰幼兒食品、乳及乳制品；GB 5009.285-2022擴大了檢測范圍，不僅適用于嬰幼兒食品、乳及乳制品，而且可以適用于肉、肉制品，以及食谷物、烘焙食品、果凍、飲料等基質(zhì)。

2）測定方法的變化：GB 5413.14-2010主要采用的是微生物法，GB 5009.285-2022在微生物方法的基礎(chǔ)上，增加了第一法液相色譜法和第二法液相色譜-質(zhì)譜法。由于檢測基質(zhì)的擴展，擴展到了肉、肉制品，以及食谷物、烘焙食品、果凍、飲料等，樣品基質(zhì)更復(fù)雜，含量更低。因此，采取了免疫親和柱對目標化合物進行凈化和富集。

Q：GB 5009.285-2022第一法&第二法，為何試樣經(jīng)酶解后，需要使用qinghuajia（或qinghuana）溶液？

解答：

維生素 B12家族中有四大成員：氰鈷胺、羥鈷胺、甲鈷胺和腺苷鈷胺。自然界中，微生物生物合成的維生素B12Z終形式為羥鈷胺、甲鈷胺和腺苷鈷胺；

但是由于它們性質(zhì)不太穩(wěn)定，在檢測過程中人為地加入qinghuajia，使天然形式的維生素B12轉(zhuǎn)化為性質(zhì)更為穩(wěn)定的氰鈷胺，因此我們檢測食品中的維生素B12只需檢測氰鈷胺。

Q：qinghuajia作為劇毒品，在使用時有哪些注意事項呢？

解答：

qinghuajia是無機劇毒品，在空氣中吸收水分和CO2，逐漸分解并放出有杏仁氣味的HCN，赤熱時，與CO2反應(yīng)形成CO和qinghuajia。劇毒?。。?/p>

操作人員必須穿好工作服，戴好手套，口罩，護目鏡。qinghuajia溶液落在皮膚上， 用大量水清洗，然后纏上有硼酸或硼油的濕繃帶。地面殘留物用五倍大蘇打溶液中和清除。

應(yīng)密閉保存，放在陰涼干燥處，與其他物品隔開，并與酸類和氧化劑隔絕。

Q:GB 5009.285-2022新標準為何要新增免疫親和前處理方法？

解答：

之前標準采用的是微生物法，其缺點是定量能力差。新方法中免疫親和柱的使用，可以將樣品中的維生素B12進行富集、濃縮，大大提高了檢出能力，同時，有效去除樣品中的干擾雜質(zhì)，然后進一步進行液相或液質(zhì)分析。

免疫親和法用于維生素B12的前處理，并不是Z近創(chuàng)立的新方法。早在2008年，GB/T 5009.217-2008標準《保健食品中維生素B12的測定》，由原衛(wèi)生部提出并歸口，中國疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)與食品安全所起草，標準中已使用了免疫親和法凈化和富集維生素B12。

隨著新標準的頒布，將有更多的食品基質(zhì)納入檢測范圍，進一步擴展了維生素B12免疫親和柱的使用。

Q:GB 5009.285-2022使用維生素B12免疫親和柱，凈化過程有哪些注意的事項呢？

解答：

在使用維生素B12免疫親和柱，為獲得穩(wěn)定的回收率和重現(xiàn)性，凈化過程注意事項：

1）過柱的速度不能太快，盡量控制在2 mL/min，保證目標物的有效充分吸附，否則會使檢測結(jié)果偏低。

2）氮吹時，氣流要緩和，不要吹干，盡量吹到0.2 mL以下，樣液中甲醇含量低于20%對目標峰的峰形基本沒有影響。（如果樣液中甲醇含量，對后續(xù)檢測存在影響，存在溶劑效應(yīng)問題，比如：峰形前延，可使用溶劑效應(yīng)消除器解決。）

峰前延、展寬、分叉！隱形殺手——溶劑效應(yīng)，到底如何有效解決？……

3）當(dāng)樣品中維生素B12超過測定范圍時，請適當(dāng)減小上柱體積，使其在檢測范圍內(nèi)，計算出準確含量。

Q：維生素B12免疫親和柱的存儲條件是?

解答：

該親和柱保存在2-8 °C條件下，絕對不能冷凍，保質(zhì)期為18個月。建議在室溫（18-30°C）下使用

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Anavo?維生素B12免疫親和柱

Anavo?維生素B12免疫親和柱能夠特異性的純化樣品中的維生素B12，它采用了柱狀瓊脂糖凝膠作為固相載體，瓊脂糖凝膠與維生素B12抗體偶聯(lián)形成免疫吸附劑，裝柱制成免疫親和柱。它能夠特異性的純化樣品中的維生素B12。維生素B12親和柱廣泛地應(yīng)用于飲料、牛奶和奶粉，飲料等樣品的提取，該方法速度快、操作簡單、準確性高，對提高食品的質(zhì)量和安全性起到十分重要的作用。

GB5009.285-2022國標中對維生素B12免疫親和柱的要求：容量≥800 ng，柱回收率≥85%。以下是Anavo?維生素B12免疫親和柱優(yōu)勢：

Anavo?維生素B12免疫親和柱

樣品的凈化

Anavo?維生素B12免疫親和柱的柱容量(Z大吸附維生素B12)為1000 ng，當(dāng)樣品中維生素B12超過測定范圍時，請適當(dāng)減小上柱體積，使其在檢測范圍內(nèi)，計算出準確含量。

將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。將上述樣品提取液注入（或分次注入）玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2mL/min（1-2滴/秒）流速緩慢通過免疫親和柱，直至液面下降到親和柱管體（未完全流干）。以2-3mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0mL水淋洗，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體。準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min（1滴/秒），收集全部洗脫液于玻璃試管中， 50 °C下氮氣濃縮吹干后，用流動相定容至0.5 mL，供HPLC或LC-MS分析。

VB12（氰鈷胺） 標準品譜圖

（100ng/mL，C18 反相色譜柱4.6*250mm）

GB 5009.285-2022國標配套耗材