原理

試樣中殘留的四環(huán)素類(lèi)、磺胺類(lèi)和喹諾酮類(lèi)藥物，用Mcllvaine-Na2EDTA緩沖液提取， 親水親脂平衡型固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。

6.1 試料的制備 取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)。

關(guān)鍵詞：發(fā)熱、回收率

要點(diǎn)：

在樣品制備時(shí)，粉碎的時(shí)間如果太長(zhǎng)，發(fā)熱嚴(yán)重的話會(huì)對(duì)回收率有影響（如四環(huán)素類(lèi)的金霉素），具體參照GB/T 30891-2014 中附錄B 的要求制樣。

8.1 提取 稱取試料1 g （精確至±0.01 g），加Mcllvaine-Na2EDTA緩沖液8 mL，渦旋1 min，超聲20 min，-2°C 10 000 r/min離心5 min，收集上清液。殘?jiān)屑恿姿猁}緩沖液8 mL，重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，混勻，備用。

關(guān)鍵詞：提取次數(shù)2次

要點(diǎn)：

?  標(biāo)準(zhǔn)品中用了2次提取，兩次提取用的提取液是不一樣的。

第1次采用Mcllvaine-Na2EDTA，此緩沖液是提取四環(huán)素類(lèi)獸殘的常用試劑，

但有幾個(gè)在磺胺類(lèi)藥物單純用Mcllvaine-Na2EDTA提取回收率不理想，第2次提取用了Mcllvaine-Na2EDTA+磷酸鹽緩沖液，對(duì)于磺胺類(lèi)藥物有較好的回收率。

關(guān)鍵詞：低溫

要點(diǎn)：

在提取過(guò)程中降低離心的溫度至-2℃可以更好的限制樣品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于樣品的提取轉(zhuǎn)移。

5.5 材料 親水親脂平衡型固相萃取柱：200 mg/6 mL，或相當(dāng)者關(guān)鍵詞：親水親脂平衡型固相萃取柱

要點(diǎn)：

?  國(guó)標(biāo)中凈化材料的是親水親脂平衡型固相萃取柱，也就是我們平時(shí)用的HLB小柱 200 mg/6 mL（納鷗科技，PN:AN60A005），HLB小柱表面同時(shí)具有親水性和疏水性基團(tuán)，對(duì)各類(lèi)極性、非極性化合物具有較均衡的吸附作用。

其吸附能力和樣品容量是 C18 鍵合硅膠的 3~10 倍，許多在 C18 難以得到保留的強(qiáng)親水性化合物，在HLB 上仍有較好的回收率。

8.2 凈化  固相萃取柱依次用甲醇 5 mL 和水 5 mL 活化，取備用液過(guò)柱，依次用水 5 mL 和20%甲醇水溶液 5 mL 淋洗，抽干，用洗脫液 10 mL 洗脫。收集洗脫液，45℃水浴氮?dú)獯蹈伞?加入復(fù)溶液 1.0 mL，渦旋 1 min 溶解殘余物，14000 r/min 離心 5 min，微孔濾膜過(guò)濾，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

關(guān)鍵點(diǎn)：氮吹

要點(diǎn)：

?  建議控制氮吹時(shí)間、溫度和流速。實(shí)驗(yàn)過(guò)程氮吹時(shí)間非常長(zhǎng)，約60分鐘，容易造成部分化合物回收率偏低（比如：四環(huán)素類(lèi)、青霉素類(lèi)）。

?  建議氮吹至100 μL 左右，不氮吹干，可以減少在氮吹過(guò)程中部分目標(biāo)化合物的損失。

關(guān)鍵詞：溶劑效應(yīng)

要點(diǎn)：

?  復(fù)溶時(shí)，加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目標(biāo)化合物的峰型，降低溶劑效應(yīng)，同時(shí)提高部分化合物的回收率。

?  此外，在色譜柱前加一個(gè)小配件（溶劑效應(yīng)消除器，PN：AN80C037），可較好解決由于樣品溶劑和流動(dòng)相不匹配而造成的溶劑效應(yīng)問(wèn)題，使峰形更好，響應(yīng)更高。

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